[問題] 關於細胞內自由態鈣離子測定之實驗問題
想請教各位達人~
剛做了細胞內自由態離子濃度之實驗~
因為實驗結果非常奇怪~想請教達人們可能原因為何?
實驗流程如下~
先將要測定之細胞用PBS清洗離心三次~
加入螢光劑 flou-3 AM 攝氏37度避光作用一小時~
(在此想先作確認~此步驟之目的是要讓細胞中酵素把flou-3 AM轉成flou-3?)
作用完再以PBS清洗~
之後分三管測吸光~
我們是測細胞溶液中對Flou-3之吸光度~(530 nm)
1- 1 ml 之Cell solution 測出之吸光值將為F
2- 0.8ml之Cell solution + inomycin + EDTA 測出之吸光值將為F min
3- 0.8ml之Cell solution + inomycin + CaCl2 測出之吸光值將為F Max
用這三個值套入公式去求出Ca含量~
三管之吸光值如下 F= 0.961 F min= 0.700 F Max= 5.187
............= ="~F Max高的很異常...
其實細胞溶液在分完三管後還有剩下我們又做了一個管1(1 ml 之Cell solution)
得到結果與之前無異~0.891~
覺得說細胞都聚集在管三有點牽強~因為他不能算最後一管~如果是最後一管還有可能~
如果說是細胞都被洗掉了(我們的技術絕對稱不上好~)~
請問為什麼F Max= 5.187?
這不是證明裡面有大量的Flou-3~有Flou-3不就代表有細胞存在阿~
恩~我承認我對這實驗並沒有完全了解~助教講的有點模模糊糊~
如果大大們看了我的實驗流程覺得有出問題~缺哪方面的敘述~請務必指出~謝謝~
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