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作者 supray 在 PTT [ Biotech ] 看板的留言(推文), 共164則
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5F→: 提醒一下 看專一性primer blast不用自己貼Template06/16 01:28
6F→: 底下物種選對 整個genome就幫你比對了06/16 01:29
7F→: 放射菌屬的genome有喔 但只能比nr資料庫06/16 01:30
4F推: 只看ddCt還OK,因為是把control樣本當1去做normalize,12/13 00:10
5F→: 如1樓所說,比較的是不同樣本的表現量12/13 00:11
6F→: 但你的比較方式就有點問題,只取dCt12/13 00:12
7F→: 不同primer或不同probe,最好是要當成不同的target12/13 00:14
8F→: 因為primer濃度,螢光強弱,threshold的值都會影響Ct12/13 00:15
9F→: 在同個樣本間無法比較12/13 00:16
10F→: 那就需要有一個確定是A_FAM,A_VIC target 1:1的樣本12/13 01:25
11F→: 當作是你的標準品12/13 01:25
14F推: acrylamide會先跟buffer混好 APS先配成10%的12/19 23:58
15F→: 通常加進去稍微混合一下 10分內就凝了12/20 00:00
16F→: 這凝膠的速度是不會有等粉末溶解的時間的12/20 00:03
17F→: 感覺是錯過凝膠的timing了12/20 00:04
18F→: 然後要做較稀的膠 我們只會減少acrylamide的量12/20 00:06
9F→: Quawell 大陸廠牌 用法跟Nanodrop一樣 台灣有代理11/28 08:37
10F→: 咦 是美國牌!11/28 08:44
12F→: 已站內信!11/29 08:53
10F推: 覺得需要先過filter的是NaOH溶液 放久很容易有結晶11/16 08:43
2F→: 針對以上兩種RNA設計primer做PCR or qPCR11/04 17:23
19F推: baseline 乾不乾淨10/14 08:43
20F→: 某些組織本身28S/18S就不會很高 所以會加看18S 28S之間的10/14 08:44
21F→: baseline 乾不乾淨10/14 08:45
22F→: 通常送NGS的RNA會建議用通column的純化方式10/14 08:53
23F→: 而且還要處理DNase !10/14 08:53
24F→: j大 都丟給廠商處理 廠商會很頭大....10/14 09:02
33F→: 更正通常頭大的是實驗室裡的技術員 QQ10/17 14:25
34F→: 真的是要常常找各家kit的供應商....10/17 14:26
8F推: 活化後產生回饋抑制也是有可能的 就又有很多實驗能做了07/24 10:36
1F→: 不太懂要回溶細胞 還是要回溶EDTA03/02 16:53
2F→: EDTA不先配成溶液的話 粉末在PBS裡不太會溶解03/02 16:54
3F→: 同上 拖一條的是你input的gDNA下太多了02/24 08:16
8F→: DNA過濃可以稀釋後再取02/24 17:43