作者查詢 / scherzoinb
作者 scherzoinb 在 PTT 全部看板的留言(推文), 共92則
限定看板:全部
看板排序:
20F推: 沒收到05/27 20:24
22F推: 今天收到了05/30 15:10
6F推: 我有些課也只授權一次或兩次,但還是沒線上可以看04/10 15:59
6F→: blank:sample + 水 + 碳酸鈉 + meoh 03/03 20:28
7F→: 應該是這樣吧~~~03/03 20:28
4F推: 我的做法是︰把培養液吸乾,加PBS洗一下細胞,吸乾03/03 19:59
5F→: 再加一些PBS,用刮刀把細胞刮下來,收在eppendroff,03/03 20:00
6F→: 再加lysis buffer+PBS 到kit說明書上的量~~~03/03 20:01
7F→: 然後就開始跑流程~~~03/03 20:03
4F→: 挑幾個菌去送定序吧~~~02/11 14:07
5F→: 你有沒有想過會不會是萃取的問題?02/11 14:08
6F→: 所以才會建議你直接用菌下去p~~~原po加油~~~~~~02/11 14:09
7F→: 再仔細看看primer夾的位置跟取代位置的關係~~~02/11 14:11
1F→: 直接拿菌去跑pcr,如有band,那就是gDNA萃取的問題,02/08 21:31
2F→: 如沒有band,那表示重訂primer~~~~~~02/08 21:32
1F推: 就圖中的1,4,我會說水有污染,因為4是正常的,01/16 10:43
2F→: 不妨多作new A primer+new ddH2O,也要是沒有band。01/16 10:45
3F→: 圖3,沒有band,只能說沒有primer可以夾出來的東西,01/16 10:49
4F→: 不妨多作old B primer+new ddH2O,也要是沒有band。01/16 10:50
2F→: 樓上說的也是另一種可能性。12/05 20:36
3F→: 重新設計RT PCR的primer,要跨過knockdown的序列,12/05 20:40
4F→: 如果knockdown成功,RT pcr就不會有band,或很淡,12/05 20:42
5F→: 確定完之後,再做protein的層次。12/05 20:45
6F→: transfection成功的話,細胞會帶有Amp抗生素的抗性,12/05 20:47
7F→: 所以在換medium時,會加Amp把沒成功的細胞殺死,12/05 20:48
8F→: 不好意思,抗生素那個我寫錯了,應該不是Amp,12/05 21:16
9F→: 你要再查一下你用的plasmid是用什麼抗生素去篩12/05 21:17
10F→: 有transfection成功的細胞。12/05 21:18
14F推: 不負責任的建議︰做不同時間點收細胞來看表現量12/03 16:45
15F→: 也許你就會知道什麼時間收細胞會比較好12/03 16:47
16F→: 還有表現量下降,是用Q-PCR測的嗎?差很多嗎?12/03 16:50
17F推: scramble、knockdown的下降量會差很多嗎?12/03 16:56
25F推: 默默地推bl大,如果是我的話,我會另外做幾組把抗生素12/05 14:17
26F→: 的量,加到2倍、3倍等,然後你要想你要做的是12/05 14:20
27F→: transient transfection或stable transfection?12/05 14:22
28F→: 再去看一下抗體認的位置是在knockdown序列之前,12/05 14:23
29F→: 還是在knockdown序列之後?scramble多放幾天看表現量12/05 14:25
30F→: 會不會變得跟normal差不多?12/05 14:26
31F→: 還有就是RT PCR的primer,要跨過knockdown的序列,12/05 14:28
32F→: 這樣你才會知道knockdown有沒有效果,12/05 14:29
33F推: 從你RT PCR的結果,很難推定你的knockdown是有效的~~~12/05 14:36
1F→:我也在念函授~~但不同科~~~一起加油吧~~~~~~05/27 14:34