[求救] 總酚含量的測定(分光光度計的使用方式)

看板Biotech作者 (皮皮)時間9年前 (2015/03/03 18:24), 編輯推噓1(109)
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小弟不知道是不是自己的操作過程錯了, 因為我是照別人跟我說的做,但小弟一直無法重現文獻的實驗結果 請各位幫我看看,謝謝 我是使用總酚含量的測定(Folin-Ciocalteu的試劑測定),先做檢量線 方法:配置不同濃度的沒食子酸(0~100μg/ml)各取30μl, 加入100μl 2N Folin試劑,接著加入2ml的水,        最後再加入1ml 20%碳酸鈉,放置兩小時後測定其在750nm的吸收度 分光光度計的方法他是跟我說:    blank(當背景):放入sample + 2ml的水 + 1ml 碳酸鈉 (歸零) 實驗組:放入sample + 100μl Folin試劑+2ml的水 + 1ml 碳酸鈉 請問小弟操作分光光度計有錯嗎?因為做出來的檢量線R^2=0.9993 但以未知的萃取物換算相對濃度的時候卻跟文獻不一致(差很大) 因為分光光度計他是口頭跟我說的,所以我也不知道我是不是做錯了, 還是背景要放甲醇(我是用甲醇配沒食子酸的)或去離子水歸零? 網路上似乎也沒有詳細的說明分光光度計的使用方式,如果有的話請告知我,謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 1.160.9.81 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1425378297.A.7B4.html

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blank也要有meoh跟folin
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03/03 18:44, , 2F
不好意思,小弟知識淺薄,如果加Folin那要怎麼比色?
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如果加了請問要怎麼比較顏色的變化?謝謝
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就看顏色變多少啊
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對不起,真的不太懂@@ 這樣blank和其他樣品槽差在哪?
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blank:sample + 水 + 碳酸鈉 + meoh  
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03/03 20:28, , 7F
應該是這樣吧~~~
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樣品本身是溶在甲醇中
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03/03 23:21, , 9F
Blank是把實驗組的sample取代為溶sample的溶劑
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03/07 12:29, , 10F
Gallic acid 溶水也可
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文章代碼(AID): #1KzOlvUq (Biotech)