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作者 ABULA666 在 PTT [ Biotech ] 看板的留言(推文), 共73則
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1F推: 看paper之前有沒有人這樣做過 ,還有表現出來的protei08/19 16:38
2F→: n的activation site是否在附近,真的沒資料可查保險一08/19 16:38
3F→: 點把tag拿掉接著做下去,有餘力可以順便比較有無tag的08/19 16:38
4F→: 優劣處。08/19 16:38
3F推: 有照datasheet放對溫度照理說不用擔心是否有壞,你的抗09/22 01:04
4F→: 體是之前放-20度沒有結凍而這次發現有結凍嗎?09/22 01:04
1F推: 觀測台?顯微鏡還是無菌操作箱?06/05 13:39
3F推: 感覺可以先問周遭有無近期會成立新實驗室的單位,相信03/23 12:56
4F→: 不少人會有興趣03/23 12:56
1F推: 影響序列容不容易有突變是因細菌分裂過快,導致你原本02/12 08:31
2F→: 放入的序列會因細菌裡一些酵素而改變。就我之前看過的02/12 08:31
3F→: 文獻跟自身經驗,溫度影響序列的因素遠大於養菌時間,因02/12 08:31
4F→: 此如果你的序列在E.coli極不穩定,是有可能在37度下培養02/12 08:31
5F→: 發生突變,因此面對像lentivirus這類有重複序列,還是02/12 08:31
6F→: 建議先從30度或更低溫度下手。至於時間問題,是當你的02/12 08:31
7F→: 細菌真的培養太久(兩天以上),細菌可能因環境壓力而導致02/12 08:31
8F→: 修剪序列。另外培養液/基建議使用LB即可,不建議用TB也02/12 08:31
9F→: 是考慮避免細菌增值過快。基本上降低溫度就會降低菌內pl02/12 08:31
10F→: asmid的copy number,因此你萃取出的量就會不多,若需02/12 08:31
11F→: 更多量請放大養菌量。02/12 08:31
20F推: 預算、時間夠就定序吧,以免有任何不確定性在02/12 18:11
18F推: 好奇如果你現在待的實驗室是用NC片,有參考先前的操作方01/21 22:41
19F→: 法嗎?如果沒有,你寫的步驟從何處參考?不過除了這些,01/21 22:42
20F→: 用Ponceus S染膠沒染出東西問題更大,應該是前處理樣本01/21 22:43
21F→: 就有問題。01/21 22:43
1F推: ......我覺得是英文的問題12/02 16:59
8F推: 怎麼感覺這是作業的題目?這兩個的意義很好想吧11/22 21:05
9F推: real-time RT-PCR可以測RNA viral load,臨床常用11/16 00:57
1F推: 你的實驗目的應該是要挑到正確的DNA片段吧?用qPCR去篩10/23 15:57
2F→: 顯得你工具用錯地方,我個人覺得不如先用cloning PCR再10/23 15:59
3F→: 直接選有機會送定序,頂多送定序前先用限制酶確認,價錢10/23 16:00
4F→: 一定比qPCR試劑低,也不會用到額外的儀器10/23 16:01
9F推: 感謝樓上糾正,看文隨手打時總覺得怪怪的XD10/23 18:45