[討論] cloning PCR check

看板Biotech作者 (飛羽)時間6年前 (2017/10/23 15:35), 編輯推噓5(5推 0噓 14→)
留言19則, 7人參與, 6年前最新討論串1/1
相信很多版上的大大使用過利用點菌PCR的方式來確認cloning 我會特別選用大於200bp 約500~1Kbp的長度 因為我覺得200bp的長度常常會不確定是不是正確的 另外膠圖上也會確認長度對不對 尤其時濃度夠不夠 長度不對的機率蠻低的 但是濃度太低 其實是偽陽性的機率會有一點高 但是最近被問到利用qPCR來做 這樣更快 也不用跑膠 只是這樣的話 除了要改用很短的設計 也不能確定產物長度 濃度也較不好認定 不知道各位大大有沒有相關的經驗或是想法 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.112.121.119 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1508744159.A.573.html
推
10/23 15:57, 6年前 , 1F
你的實驗目的應該是要挑到正確的DNA片段吧？用qPCR去篩
10/23 15:57, 1F
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10/23 15:59, 6年前 , 2F
顯得你工具用錯地方，我個人覺得不如先用cloning PCR再
10/23 15:59, 2F
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10/23 16:00, 6年前 , 3F
直接選有機會送定序，頂多送定序前先用限制酶確認，價錢
10/23 16:00, 3F
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10/23 16:01, 6年前 , 4F
一定比qPCR試劑低，也不會用到額外的儀器
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10/23 17:59, 6年前 , 5F
是cloning PCR 只是我們家有qPCR機器 就被要求用qPCR來
10/23 17:59, 5F
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10/23 18:00, 6年前 , 6F
跑cloning PCR 比較快而且不跑膠 聽起來好像也沒錯
10/23 18:00, 6F
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10/23 18:12, 6年前 , 7F
這叫colony PCR,前面就有個專家#1Ll7Pwcd
10/23 18:12, 7F
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10/23 18:15, 6年前 , 8F
真好奇是怎樣的人給出這種建議
10/23 18:15, 8F
推
10/23 18:45, 6年前 , 9F
感謝樓上糾正，看文隨手打時總覺得怪怪的XD
10/23 18:45, 9F
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10/23 21:50, 6年前 , 10F
你知道普通 PCR 和 qPCR 的價格差了多少嗎 XD
10/23 21:50, 10F
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10/23 21:52, 6年前 , 11F
況且用 qPCR 來做 colony-PCR.....如果用 SIBR Green
10/23 21:52, 11F
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10/23 21:53, 6年前 , 12F
根本沒辦法分辨是 self-ligation 還是正確 insert 的
10/23 21:53, 12F
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10/23 21:53, 6年前 , 13F
產物吧？用 TaqMan 的話....我保證你實驗室會破產 XD
10/23 21:53, 13F
推
10/23 22:30, 6年前 , 14F
建議你查一下兩者價差
10/23 22:30, 14F
推
10/24 00:36, 6年前 , 15F
定性的實驗用到定量的技術本身就怪了，定量是要花
10/24 00:36, 15F
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10/24 00:36, 6年前 , 16F
很多錢錢的
10/24 00:36, 16F
推
10/24 10:28, 6年前 , 17F
看到b大提的#1Ll7Pwcd，忍不住點進去看看，內容真是太棒
10/24 10:28, 17F
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10/24 10:30, 6年前 , 18F
了！希望常常看到幾位先進分享優質的文章
10/24 10:30, 18F
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10/24 13:15, 6年前 , 19F
感謝大大的回應 我也覺得很怪 但上頭這樣問我 我也…
10/24 13:15, 19F
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