Re: 大家看看吧
※ 引述《afa》之銘言：
: 作者: afa (我是可愛的馬鈴薯) 看板: NTUAC92
: 標題: 大家看看吧
: 時間: Sun Jan 11 01:09:08 2004
: ※ [本文轉錄自 NTUBST92 看板]
: 作者: afa (我是可愛的馬鈴薯) 看板: NTUBST92
: 標題: 通緝清河!!
: 時間: Sun Jan 11 01:02:25 2004
: 抱歉..借用系版一下^^"
: ---
: 清河 假如你還在線上的話...
: 你可不可以幫我看一下這個..
: ----
: Direct sequencing的目的如下..
: 為了要了解無法在實驗室中培養的細菌，利用此技術配合演化樹，尋找此種細菌
: 與目前已知的哪些細菌相似..
: [稍微翻一下而已啦..有一點錯的話不要太計較^^"]
: Direct sequencing的流程如下..
: 1.從土壤或水中取sample
: 2.將細胞溶解&作DNA purify
: 3.用"廣泛的"(universe)rRNA基因的primer 將purify後的DNA作PCR
: 4.將PCR後的DNA purify後並分類
: 5.將分類後的DNA分別注入E.Coli中
: 6.待E.Coli大量繁殖後 取出plasmid再跑電泳
: 問題如下..
: 1.第4步時的purify是不是要將製造rRNA基因特別分離出來?不然為什麼要再purify一次..?
: [我真的忘了耶..PCR後要再作一次purify嗎?]
我的想法阿 第二步的purify是把DNA跟其他細胞質的東西分離
而在第四步的purify是分離出不同的片段
: 2.為什麼要特別將這段DNA放入E.Coli裡面??用意是什麼??
: 假如只是要放大DNA的話..直接用PCR跑就好啦 跑多久就有多少..
: 是因為PCR的錯誤率高?[好像有聽說過這件事..但是我不確定..>"<]
: 我想了很久耶..>"< 可是還是不會><"
我記得...做PCR的時候 要放入人工的引子 才能開啟複製叉 進行複製
所以...PCR複製一遍的量 好像是有限的 就是一次只能複製你所給引子的量的DNA
所以用PCR跑到一定量的DNA之後 再分離 放進大腸桿菌之後
大腸桿菌繁殖的速度很快 不用很久的時間就可以有很大一缸的DNA可以用了吧
嗯...這是我的猜測啦 哈哈 不知道對不對
: ---
: purify應該是一定要的..因為要把雜質弄掉..我後來才想起來..
: [我們做完PCR應該有做purify吧..我真的忘了..||]
: 第二個問題呢..強者董認為PCR的確錯誤率比較高
: 不知你有什麼看法??
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: 歡迎大家一起討論~~
不過我沒聽過說PCR錯誤率比較高這件事ㄝ..求証之後告訴我一聲好嗎
拜託啦 謝謝 多學一課
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