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討論串[求救] Ligation 一直無法成功
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#4
Re: [求救] Ligation 一直無法成功
推噓13(13推 0噓 38→)留言51則，0人參與, 最新作者micocat (de novo)時間14年前 (2011/04/28 11:36), 編輯資訊
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我想請問你的 " positive control為未進行digestion的plasmids ". 是加了多少DNA 下去 transform 啊. competent cell 是自己做的嗎. 可以測一下 transformation efficiency. 如果連 uncut 的plasmid
#3
Re: [求救] Ligation 一直無法成功
推噓7(7推 0噓 13→)留言20則，0人參與, 最新作者dodomilk (豆豆奶)時間14年前 (2011/04/28 02:50), 編輯資訊
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我ligation做了三個禮拜，參考過很多protocol都失敗，最後是自己亂做做出來的. 作法如下：. vector: double digest → clean up → CIP → clean up ┐. ├→ ligation. insert: double digest → clean u
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#2
Re: [求救] Ligation 一直無法成功
推噓4(4推 0噓 5→)留言9則，0人參與, 最新作者akongapple (Mr. Kang)時間14年前 (2011/04/27 18:39), 編輯資訊
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非常感謝大家的回應，在這邊做一下補充，實驗室現有兩個plasmids是之前學長所clone出來的，而這兩個plasmids本身都是由pTTQ18 vector所modified出來的，我現在做的. 動作就是把之前學長insert進去的DNA切下來然後把我的insert進去，因為之前學長在. 作ins
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#1
[求救] Ligation 一直無法成功
推噓13(13推 0噓 23→)留言36則，0人參與, 最新作者akongapple (阿康)時間14年前 (2011/04/27 16:06), 編輯資訊
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關於ligation的相關問題，版上有許多資訊，有先爬了一下版上的相關資料，. 可是我還是想不出我的問題出在哪裡，所以想PO上來請教一下大家，拜託大家了，. 以下是我的實驗步驟：. Insert DNA：以pEGFP-C1為template，用自行設計的primers進行PCR，. primers上
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