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討論串[求救] Ligation一直失敗~
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#1
[求救] Ligation一直失敗~
推噓5(5推 0噓 6→)留言11則，0人參與, 最新作者wenwentien (期待雨後的彩虹)時間13年前 (2011/04/09 18:33), 編輯資訊
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大家好,目前在進行ligation碰到了問題,. 請大家幫幫忙. 我目前要接的insert約1.6k,而vector是8.4k左右. insert是先用PCR放大(在primer各加BamHl以及Xhol的切位), 接TA clone,. TA clone sequence結果正確, insert與
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#2
Re: [求救] Ligation一直失敗~
推噓4(4推 0噓 0→)留言4則，0人參與, 最新作者alicialai (Fairy Monster)時間13年前 (2011/04/09 19:04), 編輯資訊
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Hi, 這邊就有問題了喔~~. 所謂vector:insert = 1:5, 指的是molar ratio=1:5,. 不是volume=1:5, 依照您的做法算出來的molar ratio已經高達1:262,. 而且通常vector的濃度至少必須要50ng(100ng would even bet
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#3
Re: [求救] Ligation一直失敗~
推噓7(7推 0噓 9→)留言16則，0人參與, 最新作者wenwentien (期待雨後的彩虹)時間13年前 (2011/04/09 21:13), 編輯資訊
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不好意思啊,我這邊沒交代清楚, 我ligation時, vector是94ng(94ng*1 microliter),. insert是90ng(18ng*5miccroliter).所以對應的體積是V:I=1:5,. 又由於我vector長度是insert的5倍,所以molar ratio與體積比
(還有243個字)
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