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討論串[求救] 怎麼改善蛋白誘導的solubility?
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#3
Re: [求救] 怎麼改善蛋白誘導的solubility?
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者BLACKOA (OA)時間16年前 (2009/08/01 06:28), 編輯資訊
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可是有一點我得補充. 如果只是做D70E或者R242A的單點突變的話. 這樣的誘導都是可以成功的. 但是兩個同時的話,就不行. 當然有可能像是你們所說的folding出了問題. 或許會試看看加ㄧ些可以促進chaperone表現的物質進去看看吧. 至於IPTG的濃度. 我不確定uM的等級是否足夠. 因
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#2
Re: [求救] 怎麼改善蛋白誘導的solubility?
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者nzj (edger)時間16年前 (2009/07/30 03:25), 編輯資訊
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我不太清楚你的實驗目的為何,不過從結果來看,可以推論這蛋白質的穩定,. 離子鍵扮演重要的角色,因此當D變成E的時候,因都帶負電所以沒什麼影響,. 可是當帶正電Arg變成不帶電的Ala,因此無法形成離子鍵,因此會影響蛋白. 質的穩定,因而影響摺疊。. 在實驗的部份,用低溫的策略是可行的,不過轉速可以調
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#1
[求救] 怎麼改善蛋白誘導的solubility?
推噓2(2推 0噓 3→)留言5則，0人參與, 最新作者BLACKOA (OA)時間16年前 (2009/07/29 23:42), 編輯資訊
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大家好,小弟在蛋白誘導上遇到了一個問題. 我想要誘導的蛋白原本是在D70E有做改變. 然後我在BL21/pLysS,在pET15b(low copy number)上做誘導. 簡單的誘導過程如下:. 1. O/N culture in LB with antibiotics and 0.1% glu
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