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討論串[求救] clone 問題~vector會自黏
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Re: [求救] clone 問題~vector會自黏
推噓8(8推 0噓 14→)留言22則，0人參與, 7年前最新作者mimique (分手後才真正的認識你)時間16年前 (2009/05/25 17:40), 編輯資訊
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借標題問一下. 最近我也遇到很類似的情況. ligation之後 都是self ligation. 一開始是懷疑insert 沒切好. 後來是懷疑plasmid沒抽好 所以切的時候有問題. 所以後來有做check. 我的plasmid大概7.5kb. 用兩個RE (SalI&NotI) 各切一刀 之
(還有286個字)
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Re: [求救] clone 問題~vector會自黏
推噓3(3推 0噓 9→)留言12則，0人參與, 7年前最新作者afunafun (afunafun)時間16年前 (2009/05/22 00:57), 編輯資訊
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建議vector 作RE取的濃度不要太高 還有切完記得跑膠 看有無切開. 原po說vector會切下的片段很小無法分辨. 其實很簡單 跑1%的gel 分別load有切跟沒切的. 有切開的會變成直線 所以大小應該跟原始質體大小一樣. 至於沒切的質體依然是環狀 跑膠會跑比較快. 藉由兩者比較很容易分辨
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