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討論串[求救] Recombinant protein in insoluble form
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#3
Re: [求救] Recombinant protein in insoluble form
推噓2(2推 0噓 0→)留言2則，0人參與, 最新作者aggaci (好久沒下五子棋了...)時間16年前 (2009/04/25 14:29), 編輯資訊
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當兵當一段時間了 但應該還記得. 首先單單看sds-page是不準的. 應該用western blot比較看看. 若是WB的結果你的soluble那部份有你的蛋白質的話. 那的確可以改變其他條件增加溶解率(如改溫度、降IPTG濃度). 最差最差的情況，大不了養多一點來純化. 如果沒有，那很抱歉 你改
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#2
Re: [求救] Recombinant protein in insoluble form
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者lenti (啄木鳥)時間16年前 (2009/04/23 15:11), 編輯資訊
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首先, 你induction的時機,菌液必須要達到 OD600 0.6~0.8.. 以你敍述的培養條件, 我看你的菌液不可能達到那個吸光值.. 其次, 你說的降低培養溫度當然也是一個做法, 但降低 IPTG induction 濃度更重要.. 由你用的 1 M 降低至 0.1 mM ~ 1 mM..
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#1
[求救] Recombinant protein in insoluble form
推噓6(6推 0噓 9→)留言15則，0人參與, 7年前最新作者egoweaver (Hiko)時間16年前 (2009/04/22 18:26), 編輯資訊
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小弟最近在做protein expression的實驗，用的vector是pET30a和pGEX4T-1. 第一次養的時候因為在養1ml的時候太早養，怕它長過頭所以流程變成：. 1.pick 1 colony(pET/pGEX in BL21) in selective LB, incubate a
(還有981個字)
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