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討論串[求救] 關於protein purification
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#4
Re: [求救] 關於protein purification
推噓1(1推 0噓 0→)留言1則，0人參與, 最新作者blueashin (tRoMboNe pLaYer)時間17年前 (2009/01/14 21:28), 編輯資訊
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對於你的問題. 我以我過去的經驗可以想到的是... 可能有另外一個 protein 與你的his-tagprotein有競爭性... 或許你可以不要取elute的那些protein 而直接取loading後的enzyme solution. 然後在通一次column. 或許你的protein就可以b
#3
Re: [求救] 關於protein purification
推噓1(1推 0噓 4→)留言5則，0人參與, 最新作者boblu (六百)時間17年前 (2009/01/13 09:15), 編輯資訊
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生看站死掉了 用 PTT 回. 原 po 的狀況真的很微妙. denature form, 所以不太可能是 his-tag 沒有露出來. 有用其他的 his-tagged protein 跑過同樣的流程發現可以. 表示 protocol 大致沒有問題. 我想再問一下 原 po 說有用 western
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#2
Re: [求救] 關於protein purification
推噓1(1推 0噓 0→)留言1則，0人參與, 最新作者theessential (...)時間17年前 (2009/01/13 02:33), 編輯資訊
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先謝謝pupuwu與liuse的回答~^^". resin是reuse的, 不過每次通完後會用strip buffer洗掉Ni. Strip buffer配方如下:. 400mM EDTA, 2M NaCl, 80mM Tris-HCl, pH7.9. 菌量是100ml induction後離心下來
(還有369個字)
#1
[求救] 關於protein purification
推噓4(4推 0噓 11→)留言15則，0人參與, 7年前最新作者theessential (...)時間17年前 (2009/01/12 01:27), 編輯資訊
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先謝謝大家進來看我的問題~^^". 我想要純化出來的protein大小約52kD. induction後 也跑過PAGE確認想要的protein有被induced出來 並且在對的位置. 是以French Press破菌. 這個protein學姊之前有純化過. 差別便在於後來後來在C端接了個tag.
(還有582個字)
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