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討論串[求救] 蛋白純化imidazole的濃度
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#3
Re: [求救] 蛋白純化imidazole的濃度
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者Janeliuu (rr)時間18年前 (2008/03/09 13:40), 編輯資訊
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Hi,. 1. Add 0.5% triton X-100 into the binding buffer. It reduces the. non-specific binding to some degree.. 2. Try to pass the eluate through various
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#2
Re: [求救] 蛋白純化imidazole的濃度
推噓1(1推 0噓 0→)留言1則，0人參與, 最新作者mckendri (豬頭三)時間18年前 (2008/03/08 23:19), 編輯資訊
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可以用AKTAprime先跑個gradient. 就能找出每種protein的elution conc.. 不同protein的binding能力不同. 我做過的protein從65 mM ~ 150 mM 都有. 所以一定要先測過. 不過其實這樣也不一定能拿到很純的protein. 如果妳的pro
#1
[求救] 蛋白純化imidazole的濃度
推噓7(7推 0噓 10→)留言17則，0人參與, 最新作者ayinie (心力交瘁........)時間18年前 (2008/03/07 20:43), 編輯資訊
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我的蛋白是接在pET28b帶有6-His tag. 使用Ni-NTA純化蛋白. 之前使用Lysis 10mM/10ml、Wash 20mM/20ml、Elution 250mM/3ml. 結果每次跑膠染comassie blue出來都會有兩條bands. 一條在44kD是我的目標蛋白. 一條在17k
(還有138個字)
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