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討論串[問題] TA cloning 相關問題?
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#5
Re: [問題] TA cloning 相關問題?
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者lchd (...)時間18年前 (2007/10/03 01:16), 編輯資訊
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我以前做TA 做完A-tailing 之後 是沒有再純化一次的. 可能能的原因我想的到的.... 1.ligase出現問題.... 2.ligation buffer ATP 濃度不夠....(可能buffer放太久 這個我不是很確定. 不過之前做 額外加入ATP有提高過效率）. 3.Amp pla
(還有6個字)
#4
Re: [問題] TA cloning 相關問題?
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者hal (結訓了...)時間18年前 (2007/10/02 23:45), 編輯資訊
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推測原PO可能用PFU做PCR所以產物沒有多加上A. 因此才要再多加這個實驗步驟. 不過PCR產物如果只有單一條的話應該不用純化吧. 直接加taq還有dATP及小部分buffer就可以了吧. --. ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc). ◆ From: 61.231.16.159.
#3
Re: [問題] TA cloning 相關問題?
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者dropdred (keep the faith)時間18年前 (2007/10/02 23:27), 編輯資訊
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^^^^^^^^^^polymerase不是本來就會接上A嗎??. 是額外做這個動作來增加效能嗎??. --. ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc). ◆ From: 61.230.14.108.
#2
Re: [問題] TA cloning 相關問題?
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者tilapia.時間18年前 (2007/10/01 22:57), 編輯資訊
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※ 引述《borhen.bbs@ptt.cc (希望夢想成真)》之銘言：. 不需要純化,但不要取太多A-tailing產物做ligation.. 取1-3ul就好,另外PCR的產量最好不要太少. --. ╭──── Origin:<不良牛牧場> bbs.badcow.com.tw (210.200.
#1
[問題] TA cloning 相關問題?
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者borhen (希望夢想成真)時間18年前 (2007/10/01 21:26), 編輯資訊
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請問一下~!@@. PCR純化完 ==> 把A接上去 ==> 要在純化一遍 嗎? ==> TA vector ligation. 因為發現到TA 對於我來說很難上~ 每次只有二十五顆 只有一顆是我要的. 我想問有可能是哪些原因??. --. ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc). ◆ From
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