Re: [問題] TA cloning 相關問題?

看板Biotech作者 (...)時間18年前 (2007/10/03 01:16), 編輯推噓0(0推 0噓 0→)
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※ 引述《borhen (希望夢想成真)》之銘言： : 請問一下~!@@ : PCR純化完 ==> 把A接上去　==> 要在純化一遍 嗎? ==> TA vector ligation : 因為發現到TA 對於我來說很難上~ 每次只有二十五顆 只有一顆是我要的 : 我想問有可能是哪些原因?? 我以前做TA 做完A-tailing 之後 是沒有再純化一次的 可能能的原因我想的到的... 1.ligase出現問題... 2.ligation buffer ATP 濃度不夠....(可能buffer放太久 這個我不是很確定 不過之前做 額外加入ATP有提高過效率） 3.Amp plate濃度過高... 4.Insert太長.... insert vector比例稍微調整一下看看 5.competent cell效率不好.... 你可以試著改變這些條件看看 祝你成功... -- -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 123.193.199.212
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