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討論串[問題] 關於real-time PCR的結果
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#5
Re: [問題] 關於real-time PCR的結果
推噓0(0推 0噓 3→)留言3則，0人參與, 最新作者aggaci (初學鋼琴中)時間18年前 (2007/07/11 20:25), 編輯資訊
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通常是一定要全疊在一起. (我都做2平行的重複，reagent太貴了). 我都是把兩管(算2.1管)的量"均勻且不起泡"混在一起在分裝到兩個PCR tube裡. 這樣做絕對超準！！. --. My immature blog. http://www.wretch.cc/mypage/aggaci.
#4
Re: [問題] 關於real-time PCR的結果
推噓1(1推 0噓 2→)留言3則，0人參與, 最新作者Highwind (小羊回來了)時間18年前 (2007/07/11 19:42), 編輯資訊
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我知道了,你的三重複跟我指的不一樣. 不完全重疊我會歸咎於系統誤差. 很可能是taq效率的問題. Mg加的量的問題,機器升降溫也會誤差可能是醫學院的都愛管表現量吧,成見是呀.很像做transfection這時應該問qPCR的偵測適不適合2倍內的結果. 對於基因量的分析,你拉檢量線的方法是正確的. 不
#3
Re: [問題] 關於real-time PCR的結果
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者elderbear (曖昧不好不要曖昧)時間18年前 (2007/07/11 13:30), 編輯資訊
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想請教一下 重複之間有差異(假設三重複的曲線不完全重疊). 大家會把這樣的差異歸納在哪裡? (取樣問題? pipeting error?? PCR 效率???). 還有什麼其他我忽略的可能嗎? 還是就是機差??. 我自己在做也是做三重複.... specialist 是跟我說當兩條線很接近而有一條較
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#2
Re: [問題] 關於real-time PCR的結果
推噓2(2推 0噓 1→)留言3則，0人參與, 最新作者Highwind (小羊回來了)時間18年前 (2007/07/10 21:58), 編輯資訊
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才做三重複喔. 六重複再來看吧,PCR的差異很大喔簡單的定量就拿該gene稀釋10x,100x.1000x與Ct做檢量線條件抓的好通常還滿直的. 這樣就能比較出與control的倍數差異. housekeeping gene也做相同的事,務求precision提高. 如果同一批連housekeepi
#1
[問題] 關於real-time PCR的結果
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者leondemon (狗狗)時間18年前 (2007/07/10 19:07), 編輯資訊
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請問一下 如果一個基因做三重複之後. 要如何判讀必須捨棄其中一個數據呢????. 是利用Q-test嗎?. 另外要看基因表現量是否有差異，. 是不是直接拿taget gene的Ct去減掉housekeeping gene的Ct(請問這叫相對定量嗎?). 然後在拿實驗組的數據去和對照組的數據做比較?
(還有8個字)
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