Re: [問題] 關於real-time PCR的結果
※ 引述《elderbear (曖昧不好不要曖昧)》之銘言：
: 想請教一下 重複之間有差異(假設三重複的曲線不完全重疊)
: 大家會把這樣的差異歸納在哪裡? (取樣問題? pipeting error?? PCR 效率???)
: 還有什麼其他我忽略的可能嗎? 還是就是機差??
我知道了,你的三重複跟我指的不一樣
不完全重疊我會歸咎於系統誤差
很可能是taq效率的問題
Mg加的量的問題,機器升降溫也會誤差
: : 簡單的定量就拿該gene稀釋10x,100x.1000x與Ct做檢量線
: : 條件抓的好通常還滿直的
: : 這樣就能比較出與control的倍數差異
: : housekeeping gene也做相同的事,務求precision提高
: : 如果同一批連housekeeping gene都差異很大就不用做了,從頭練技術
: : 題外話
: : 你看到結果沒差個5-6倍,最後還用統計硬凹的paper請懷疑他
: 我不太懂基因表現量的分析是怎麼分析的?
可能是醫學院的都愛管表現量吧,成見
: 不過我是在作基因改造含量的分析
: 對兩個目標片段拉兩個檢量線
: 然後把同個樣品的兩個基因的量相除得到基因改造含量的比
: 可是不是算出來多少就是多少嗎?
: (舉例來講,放0.1%樣品可能做出0.08~0.12% 放0.5%樣品可能作出 0.46~0.56%)
: 不太懂什麼叫做"結果沒差個5-6倍"這樣的結果?
: 可是幫忙說明一下嗎??
是呀.很像做transfection
這時應該問qPCR的偵測適不適合2倍內的結果
對於基因量的分析,你拉檢量線的方法是正確的
不過如果做三次就要捨去極值,的確不夠
如果照老闆的說法用平均的,應該很難看,也不見得信賴
反正花的不是自己的錢
就再重複吧
好的研究結果才是對老板最好的報酬
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◆ From: 221.120.56.101
推
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