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討論串[問題] subculture後,cell在dish上分布不均勻
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#8
Re: [問題] subculture後,cell在dish上分布不均勻
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者toasted.時間18年前 (2007/05/02 00:47), 編輯資訊
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MEF我有養過. 提供一下我passage的方法給你參考看看. 先倒掉medium後用PBS wash，10cm dish加1 ml 0.25%trypsin-EDTA 放置incubator. 中作用2min，再加至少等量的medium去中和trypsin的作用，吸至50ml tube中離心，.
(還有603個字)
#7
Re: [問題] subculture後,cell在dish上分布不均勻
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者boyo (29大頭)時間18年前 (2007/05/02 00:36), 編輯資訊
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還包括mouse and human ES cell. MEF 跟 ES cell的處理跟其搭種類的cell line很不一樣. 一般在處理MEF的時候 從第一代養到第五代就差不多是極限了. 第五代就要用Mito.C treat 然後凍起來或直接用. 13.5天那取胚胎做MEF的過程做的好 是一次可
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#6
Re: [問題] subculture後,cell在dish上分布不均勻
推噓1(1推 0噓 1→)留言2則，0人參與, 最新作者Highwind (小羊回來了)時間18年前 (2007/05/01 23:34), 編輯資訊
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拿個50ml tube或flask把所你總體積的medium和細胞下去搖. 最後再分成你想要的盤數. 這樣就不會在dish上要搖又不敢搖. --. ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc). ◆ From: 221.120.41.216.
#5
Re: [問題] subculture後,cell在dish上分布不均勻
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者studyno1 (汲取知識)時間18年前 (2007/05/01 22:26), 編輯資訊
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這個方法我也試過 也曾在BCRC上看過這樣的作法. 其實理論上加入的culture medium就可以中和trypsin的作用了. 所以不用再離心吸去上清液也可以. 依照我個人經驗 比較過離心與不離心 發現離心後的細胞貼附的狀況較好 長的也較好. 不過這是在我的cell model下 總是要用對自己
#4
Re: [問題] subculture後,cell在dish上分布不均勻
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者mimosasky (浪者天涯)時間18年前 (2007/05/01 20:44), 編輯資訊
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我們也會利用pipet打散細胞. trypsin切下後細胞並不見得會呈現"個體"狀態. trypsin可能是把細胞"整片"切下. 所以要再用pipet"儘量"讓它們完全均勻分佈在medium中. 但跟各位前輩不同的地方是, 我們沒有再離心去廢液. 這目的是...?!. 在較大的dish中比較不會發生
(還有83個字)
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