Re: [問題] subculture後,cell在dish上分布不均勻
※ 引述《mimosasky (浪者天涯)》之銘言：
: 我們也會利用pipet打散細胞
: trypsin切下後細胞並不見得會呈現"個體"狀態
: trypsin可能是把細胞"整片"切下
: 所以要再用pipet"儘量"讓它們完全均勻分佈在medium中
: 但跟各位前輩不同的地方是, 我們沒有再離心去廢液
: 這目的是...?!
這個方法我也試過 也曾在BCRC上看過這樣的作法
其實理論上加入的culture medium就可以中和trypsin的作用了
所以不用再離心吸去上清液也可以
依照我個人經驗 比較過離心與不離心 發現離心後的細胞貼附的狀況較好 長的也較好
不過這是在我的cell model下 總是要用對自己細胞比較好的方式
所以不放心的話那就都試試 看看對細胞有沒有影響
而且再離心也可以吸掉一些死細胞的細胞碎片或其他懸浮物
細胞生長的background會比較乾淨 以上是自己的經驗 參考看看囉
: 在較大的dish中比較不會發生細胞分佈不均的情況
: 通常只會在較小的well中發現
: 但保險起見
: 我們會先知道該細胞完全貼附的時間(我們的約30分@@a)
: 在這時間內會偶爾去給它搖個幾下(約隔10分鐘左右吧)
: 搖的方法也儘量避免讓它的液面呈漩渦狀轉動
: 可以左右各讓它傾斜幾秒鐘, 再前後幾秒鐘
: 這樣子~我們家的細胞老大都還滿聽話的
: 也很少看到有"聚賭"的情形= =|||
: 以上參考~~
: ※ 引述《studyno1 (汲取知識)》之銘言：
: : ^^^^^^^^^^^^^^^^^^^請問這步驟是specific for MEF 嗎?
: : 從大學到碩班 老師學長姐教subculture都沒有這個步驟耶
: : 都是加完trypsin-EDTA後RT靜待一下(或放incubator一會兒) 然後輕拍dish
: : 或是直接用pipet把細胞沖下來 收集細胞液到離心管就直接離心了耶
: : 我只有這個步驟不太一樣 其他都相同
: : 加了這步驟的目的是什麼?
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