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討論串[問題] western blot 壓片的問題..

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[問題] western blot 壓片的問題..

推噓0(0推 )留言0則，0人參與作者linker0726 (試著獨立)時間18年前 (2006/07/20 00:00)資訊

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今天壓片子的時候，perk的訊號很強..壓了5秒就很黑了. 但是erk的壓了20分鐘完全沒有東西.... 請問是哪裡出錯了....之前有成功壓出來過.... erk的濃度是1:1000.... 感謝. --. ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc). ◆ From: 125.228.209.18

Re: [問題] western blot 壓片的問題..

推噓0(0推 )留言0則，0人參與作者threestars (等待)時間18年前 (2006/07/20 19:05)資訊

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最近一直在押 ERK. 你問的是protein的ERK1/2 還是phospho-ERK. ERK量比較少本來是要壓久一點但20分鐘好像太久了. 你的ECL有稀釋嗎？. ERK 1：1000算滿濃的如果還出不來你可能要檢查一下是不是1抗或2抗壞掉. 抗體加入blocking buffer時 b

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Re: [問題] western blot 壓片的問題..

推噓1(1推 )留言1則，0人參與作者linker0726 (試著獨立)時間18年前 (2006/07/21 10:50)資訊

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嗯嗯...其實我是新手..這是第二次自己跑western blot... 請問一些很基本的問題..我怕我是不是記錯了.... ERK還是phospho-ERK的訊號哪個比較強阿...我有點搞混了...只記得壓第一片時螢光很. 明顯.壓了一秒BAND就很漂亮了..我記得這個是ERK吧..(也就是說我第

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Re: [問題] western blot 壓片的問題..

推噓6(6推 )留言10則，0人參與作者threestars (等待)時間18年前 (2006/07/21 13:51)資訊

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PBS應該不會干擾用PBST效果很OK. 稀釋抗體我用blocking buffer. 也就是10% 安佳脫脂奶粉(好像安佳的效果最好)溶在HBS buffer. 我也用過實驗用BSA/PBST(PBS+Tween20) 也是10%. 效果更好不過實驗用BSA 很貴所以我比較少用. (TBS

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Re: [問題] western blot 壓片的問題..

推噓2(2推 )留言2則，0人參與作者linker0726 (試著獨立)時間18年前 (2006/07/21 18:36)資訊

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恩.其實我不知道這兩個有什麼差別耶..PBST多加了什麼嗎?? 多加了tween20嗎?. ^^^^^^^^^^ 請問這是什麼阿??. 嗯嗯..我會跟學長姐說看看. 感謝你的意見. --. ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc). ◆ From: 125.228.152.233.

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