Re: [求救] Dual-Luciferase 的 Internal control

看板Biotech作者puec2 ( .＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿.)時間12年前 (2013/07/22 22:10)推噓1(1推 0噓 18→)

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真是新奇第一次看到可以用其他promoter增強luc的表現量的做法請問這樣transcription initiation site算誰的？算妳的promoter還是SV40 promoter? Enhancer如妳所看到的也有可能干擾SV40 活性總覺得這個方法不太對妳現在該做的就是直接測沒有SV40 promoter狀態下的活性因為妳是用fLic 所以我假設沒有sn比太低的問題如果活性太低可以試試看用Gausia luciferase or Nano luciferase 總之我覺得用其他promoter來增強是很難理解的一件事 ※ 引述《xxtomnyxx (翼天)》之銘言： : 請教一下， : 由於我所使用的 promoter/enhancer 屬於較弱的類型， : 之前教我 Luciferase assay 的老師是建議是把我想研究的基因的 : promoter/enhancer 接到 pGL3-promoter-vector 上， : 利用上面的 SV40 early promoter 增強 ffLuc 的訊號。 : 現在我遇到一個問題， : 如果我懷疑我的實驗操作也有可能會影響到那段 SV40 early promoter， : 也因此每做一次實驗我都還要做 pGL3-promoter-vector 的 control。 : 我想問的是： : 我能不能把 pGL3-promoter-vector 上的 ffLuc 換成 rLuc， : 用這個 rLuc 當作 internal control 去消除實驗操作對 SV40 early promoter 的影響？ : 同時 transfect 這兩個有許多相同序列的 plasmid 到細胞內， : 會不會影響我的實驗結果？ : PS: 原本用的 internal control 是實驗室自己做的用 UbC promoter 表現的 rLuc。 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 219.80.238.185

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xxtomnyxx

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xxtomnyxx

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aceliang

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