Re: [求救] plasmid 問題
※ 引述《vconquer (vconquer)》之銘言：
前面恕刪~
: 最近抽Plasmid 又遇到一個難解的問題 首先先從plate上點單一菌落以LB+抗生素
: 培養某菌 第一次抽出來跑電泳 完全沒東西 於是我和別人借了他的plate 重新點菌
: 發現該菌 完全沒有長(plate是LA+am)
此部分建議確認一下這個 plasmid 確實是用 amp 篩選(應該是啦)
畢竟從兩個不同來源plate上挑的都沒長, 抗生素的種類可能有問題,
確認沒錯的話, 也有可能是:
1.抗生素太濃 (更改濃度)
2.有該 plasmid 的菌固定長很慢 (如果 plasmid size 不大, 這個機率很小)
3.盤子上的菌老化了
(如果手頭上還有 plasmid (一點點即可), 可 retransform 回新的 competent cells,
再重挑出單一 colony 確認, 對的話再凍菌保存)
: 我跑了colony PCR 想要確認這株菌裡面還有沒有
: 我要的片段 但跑出來 又是正確的= = 雖然我挑單一菌落的數量不多 今天想說再來
: 重抽Plasmid試試看 發現有抽出東西 但是 有兩條band 還有smear現象.....
: 我不知怎麼辦阿ˊˋ
plasmid 抽出來直接跑電泳確實會不止一條 band 沒錯 (亦可能 smear),
因為有supercoiled, linear, circular forms 那些的...
要確認的話建議用 RE 切一刀, 再跑電泳看是否為單一 size 才準
希望有幫到忙~
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求救
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