Re: [求救] pcr跑膠呈色不均

看板Biotech作者 (是喜歡msn不是喜歡男生)時間13年前 (2012/11/05 17:36), 編輯推噓6(6019)
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※ 引述《likemsn (是喜歡msn不是喜歡男生)》之銘言: : 這個...新手小弟上來發問 : 既marker跑不一樣高之後,又遇到跑膠的顏色不一樣 : 不曉得各位能不能理解我的意思 : 就用EtBr染完色後,膠體呈現上面顏色較亮的情形 : 就是在洞口那排較亮 : 可是我明明染色時是平行放入應該不會有染色不均的問題 : 而且有時候會出現有時則否,完全是看天吃飯= = : 最近則是比較常出現 : 到底是哪個環節出現問題 : 不曉得有沒有好心的大大可以點破癥結點,感恩~ 放照片起來麻煩各位大大幫我解惑 http://www.wretch.cc/album/show.php?i=t7396&b=15&f=1598928636&p=0 再次感謝~^^ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 210.60.122.160

11/05 18:08, , 1F
先確定膠有完全溶解(要搖一搖)並凝固完全(可冰冰箱)
11/05 18:08, 1F

11/05 18:09, , 2F
EtBr外染液、TAE有定期更新
11/05 18:09, 2F

11/05 18:10, , 3F
選對適當marker,才不會跑太久使EtBr集中上方
11/05 18:10, 3F
請問一下sunny大你的TAE是多久更換一次阿?如果是在每天都跑的情況下

11/05 22:58, , 4F
請把你的狀況詳細敘述一下吧,之前你那篇說用7%agarose
11/05 22:58, 4F

11/05 22:58, , 5F
這次的情況是甚麼呢?y
11/05 22:58, 5F
n大,這次的情況跟上次一樣,只是放照片起來供大家解惑,因為我也不太確認之前我的 推估是否正確

11/06 09:10, , 6F
7%似乎不是原PO推的
11/06 09:10, 6F
※ 編輯: likemsn 來自: 210.60.122.160 (11/06 11:28)

11/06 15:25, , 7F
一天跑三次,每次30分鐘,約3~4天換一次TAE
11/06 15:25, 7F

11/06 15:26, , 8F
你可以用血清瓶回收reuse TAE,即可以增加使用次數
11/06 15:26, 8F
我不用的TAE都倒掉說,覺得好浪費。那sunny大你所謂的增加使用次數是指?還可以再跑?

11/06 15:26, , 9F
可是主要還是要buffer乾淨為主~
11/06 15:26, 9F

11/06 15:27, , 10F
如果不裝瓶而放室溫,其水分也會不斷蒸發使濃度改變
11/06 15:27, 10F

11/06 15:32, , 11F
如果是實驗data,建議還是以新的buffer使用為主
11/06 15:32, 11F

11/06 15:34, , 12F
剛跑過的buffer建議不要馬上再跑,太熱會不好看~
11/06 15:34, 12F

11/06 16:10, , 13F
band都很直看起來很ok,只是你要觀察的band size小,下次可以
11/06 16:10, 13F

11/06 16:13, , 14F
不要跑那麼下面,就不會糊糊的。此外,膠上方染得比較亮並不影
11/06 16:13, 14F

11/06 16:20, , 15F
響結果觀察,下次你跑短時間染色看看,應該亮的區域會比現在大
11/06 16:20, 15F

11/06 16:30, , 16F
(如果內染的話)。千萬別因此一直卡在這裡~
11/06 16:30, 16F
回j大,因為我們家老闆是求好心切型的,所以還是希望跑出來能漂亮。如果是短時間 染色怕出來的band就沒那麼亮 ※ 編輯: likemsn 來自: 210.60.122.160 (11/06 17:00)

11/06 19:58, , 17F
我的意思是 跑完一次後 若當天沒有要再跑
11/06 19:58, 17F

11/06 19:59, , 18F
即可將TAE倒入瓶內鎖緊 避免水分蒸發
11/06 19:59, 18F

11/06 19:59, , 19F
如此可減少鹽類濃度改變的程度
11/06 19:59, 19F

11/06 20:00, , 20F
如果真的想要好看 那建議還是用內染的方式
11/06 20:00, 20F

11/06 20:00, , 21F
殘留的EtBr用酒精或照光都可以去除 並沒有那麼可怕
11/06 20:00, 21F

11/06 20:03, , 22F
如果真的要跑很久 TBE也可以列入考慮了
11/06 20:03, 22F
感謝sunny大不厭其煩說明,小弟會依照您指示的方法試試~^^ ※ 編輯: likemsn 來自: 1.160.236.179 (11/06 21:50)

11/06 22:38, , 23F
你可以染久一點。然後再用水退染,另外膠不要鑄太厚也是
11/06 22:38, 23F

11/06 22:38, , 24F
可以試試看
11/06 22:38, 24F

12/19 13:58, , 25F
看起來是褪染有問題. 所以背景值過高
12/19 13:58, 25F
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