[求救] pcr跑膠呈色不均

看板Biotech作者 (是喜歡msn不是喜歡男生)時間13年前 (2012/08/14 16:43), 編輯推噓4(4推 0噓 22→)
留言26則, 10人參與, 最新討論串1/2 (看更多)
這個...新手小弟上來發問 既marker跑不一樣高之後，又遇到跑膠的顏色不一樣 不曉得各位能不能理解我的意思 就用EtBr染完色後，膠體呈現上面顏色較亮的情形 就是在洞口那排較亮 可是我明明染色時是平行放入應該不會有染色不均的問題 而且有時候會出現有時則否，完全是看天吃飯= = 最近則是比較常出現 到底是哪個環節出現問題 不曉得有沒有好心的大大可以點破癥結點，感恩~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 210.60.122.160
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08/14 18:26, , 1F
EtBr有帶電, 本來就會隨著電泳往上爬吧 是問這個嗎?
08/14 18:26, 1F
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08/14 18:43, , 2F
是不是有新加EtBr還沒混勻就放下去 不然就照膠前泡水
08/14 18:43, 2F
推
08/14 22:45, , 3F
這個應該是staining外染
08/14 22:45, 3F
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08/14 23:42, , 4F
看起來是外染，然後是膠的問題
08/14 23:42, 4F
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08/14 23:44, , 5F
幾%的膠，agarose有沒有煮融，well跑之前沖一下
08/14 23:44, 5F
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08/15 09:19, , 6F
不好意思可否再問一下外染是?
08/15 09:19, 6F
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08/15 10:55, , 7F
外染就是你跑完膠,丟到EtBr(已稀釋)裡面染
08/15 10:55, 7F
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08/15 11:24, , 8F
對對，我們實驗室是用外染的方式
08/15 11:24, 8F
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08/15 11:25, , 9F
剛剛我特別把煮膠時間延長，就看下午跑出來結果如何~
08/15 11:25, 9F
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08/15 11:26, , 10F
謝nike大還有樓上幾位大大解答~^^
08/15 11:26, 10F
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08/16 16:27, , 11F
照膠後結果還是一樣耶，還是洞口那排較亮，怎辦?
08/16 16:27, 11F
推
08/16 16:43, , 12F
煮太久%數會跑掉喔~水會蒸發
08/16 16:43, 12F
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08/16 23:17, , 13F
agarose是哪一牌的，是否有過期?
08/16 23:17, 13F
推
08/17 02:56, , 14F
染完照膠前用水洗一下，另外可以的話放一下照片吧!
08/17 02:56, 14F
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08/17 21:11, , 15F
外染一般不會有這種問題，我也認為應該放照片上來看看。
08/17 21:11, 15F
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08/20 21:40, , 16F
看樣子應該是膠的關係,我用微波爐加熱25ml 7% agarose
08/20 21:40, 16F
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08/20 21:42, , 17F
分段加熱兩次各40秒,凝膠約30分鐘,110V跑起來蠻漂亮的
08/20 21:42, 17F
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08/20 21:42, , 18F
然後.....是用過期的agarose XD
08/20 21:42, 18F
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08/21 13:38, , 19F
Agarose有用到7% 會不會太高@@?
08/21 13:38, 19F
推
08/25 02:53, , 20F
7% !!!?
08/25 02:53, 20F
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08/28 16:14, , 21F
我是原PO，我不曉得是不是因禍得福，今天跑電泳時有一隻小
08/28 16:14, 21F
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08/28 16:15, , 22F
強跑進去淹死，所以我把TBE buffer倒掉換新的，結果跑出來
08/28 16:15, 22F
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08/28 16:17, , 23F
結果就沒有well那排比較亮的情形了Orz
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08/28 16:19, , 24F
所以電泳槽的TBE buffer離子也是會消耗的囉?
08/28 16:19, 24F
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09/03 13:44, , 25F
離子會不平衡
09/03 13:44, 25F
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04/26 16:30, , 26F
0.7% agarose 抱歉打錯了
04/26 16:30, 26F
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文章代碼(AID): #1GAW_Eol (Biotech)
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