Re: [求救] 2D電泳高手解惑
※ 引述《adsf1105 (ㄟ )》之銘言：
: 請問板上神人大大們:
: 小弟弟第一次利用thermo Mem-PER Eukaryotic Membrane Protein Extraction Kit
: 純化出細胞的膜蛋白去跑2D，發現在跑一維時，最後在30000VHr時只跑到大約8000VHr ><
: 之後和老師討論可能是因為detergent的問題，所以第二次先利用thermoPierce SDS-PAGE
: Sample Prep Kit 去除過多的detergent，但因為sample濃度不夠高因此本來150ul sample
: + 100 ul rehydration buffer改用250ul sample+50 ul rehydration buffer
: 結果發現跑了24hr也只跑到218VHr(還在S2)，完全上不去~
: 以下是一維的program
: S1 50V/strip step-n-hold 12 hr
: S2 500V step-n-hold 500Vhr
: S3 1000V step-n-hold 1000Vhr
: S4 3000V gradient 3000Vhr
: S5 5000V gradient 5000Vhr
: S6 8000V gradient 8000Vhr
: S7 8000V step-n-hold 30000Vhr
: S8 1000V step-n-hold 12 hr
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: 有沒有可能是我將rehydration bf 量減少的影響，導致電壓上不去???
: 有沒有2D高手跑過膜蛋白的經驗，可以提供小弟弟一些迷津^^
你的rehydration buffer和Lysis 是同一個嗎?
我之前用是同一個
確認一下你的lysis裡面的detergent是不是雙電性的
而且你的應該是連第一步就沒上去
50*12 就有600 Vhr了
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 114.36.99.177
推
08/03 17:38, , 1F
08/03 17:38, 1F
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