[求救] 2D電泳高手解惑

看板Biotech作者 (ㄟ )時間13年前 (2012/08/02 16:56), 編輯推噓1(1推 0噓 1→)
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請問板上神人大大們: 小弟弟第一次利用thermo Mem-PER Eukaryotic Membrane Protein Extraction Kit 純化出細胞的膜蛋白去跑2D，發現在跑一維時，最後在30000VHr時只跑到大約8000VHr >< 之後和老師討論可能是因為detergent的問題，所以第二次先利用thermoPierce SDS-PAGE Sample Prep Kit 去除過多的detergent，但因為sample濃度不夠高因此本來150ul sample + 100 ul rehydration buffer改用250ul sample+50 ul rehydration buffer 結果發現跑了24hr也只跑到218VHr(還在S2)，完全上不去~ 以下是一維的program S1 50V/strip step-n-hold 12 hr S2 500V step-n-hold 500Vhr S3 1000V step-n-hold 1000Vhr S4 3000V gradient 3000Vhr S5 5000V gradient 5000Vhr S6 8000V gradient 8000Vhr S7 8000V step-n-hold 30000Vhr S8 1000V step-n-hold 12 hr ----- 有沒有可能是我將rehydration bf 量減少的影響，導致電壓上不去??? 有沒有2D高手跑過膜蛋白的經驗，可以提供小弟弟一些迷津^^ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.113.173.102
推
08/04 13:08, , 1F
我只是一提 現在夏天 你有讓機器吹冷氣嗎~
08/04 13:08, 1F
→
08/04 13:09, , 2F
你的機器上面有沒有水氣?
08/04 13:09, 2F
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文章代碼(AID): #1G6a2pEh (Biotech)
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