Re: [求救] FPLC injection 已修改並詳述步驟
如果UV壞了, 妳看到的是平的UV line, 雜訊這麼大,就我所知有兩各可能的原因
1. 妳的column進空氣了; 2. flow-cell很髒 (請熟析FPLC的同事還是朋友幫你處理一下)
我看起來你的sample都沒有進去column, 反倒是空氣進去了
誠心建議你, 找附近實驗室有沒有人熟悉FPLC的,直接示範一次
※ 引述《betouched (上上下下)》之銘言：
: update 資訊與方法,我的FPLC都沒有出現peak 不知道問題在哪裡
: 用打的描述方法有點困難,所以我將照片上傳到dropbox
: http://0rz.tw/lHY8Y 這是我打出來的圖,UV是那很雜的那條,雜訊很大,沒轍
: http://0rz.tw/oCOoA 方法前半段
: http://0rz.tw/YoFue 方法後半段
: http://0rz.tw/aQpOI Gradient 曲線
: http://0rz.tw/hVfWp 前人留下來的圖,打出來應該要長這樣
: 我是在run方法之前.就先inject sample
: 我手動將 injection valve 轉到 inject 然後打1ml 0.2mg/ml 的sample
: 再轉到 load 然後按下 run
: ps.由於實在都沒有peak 所以我連,先 load 在 inject 都玩過了
: Setup Lamp Run Time 顯示
: Hg 22218h
: 其實我一直認為是 Lamp 問題,使用說明書上寫的是 run time
: 我的認知是,燈泡使用時間,所以我認為Lamp已經該換了
: 可是我這邊的博後
: 堅持說他之前才換過,那是倒數時間
: 這個博後,我真的有說不完的想罵他的話
: 覺得還是自救比較快
: 使用的儀器
: Pump P-920
: UPC-900
: ※ 引述《betouched (上上下下)》之銘言：
: : 之前用FPLC的學長姐不見了之後我才進實驗室
: : 現在一個人在努力學習怎麼用這個儀器
: : 儀器 AKTA FPLC
: : 軟體 Unicorn
: : Column : resource Q 1ml
: : Method:沿用前人的 method
: : 1. wash by water
: : 2. wash by protein solution AB for 20 min
: : 這期間我用 protein solution A 洗了 sample loop (2ml)
: : 然後 inject sample into sample loop for 1 ml (0.25mg/ml)
: : 有確定此時 InjectionValve 是block住的
: : 3. injection
: : 這裡螢幕上顯示不是很明瞭
: : 0.02min InjectionValve inject
: : 0.02min Block Sample_Injection
: : 0.02min Base Volumn
: : 2.02min End Block
: : 2.02min InjectionValve Load
: : 2.02min End Block
: : .
: : .
: : .
: : 4. Gradient B from 0-100% for 40 min
: : 標準品應該在20分鐘左右出來<可是UV還是保持在0上下跳動
: : 5. 哭哭
: : 一個人看著 FPLC 使用說明書,東弄弄西弄弄得,真是頭大,來個人幫幫我吧 哭哭
: : ◆ From: 147.126.101.168
: : 推 bluep:簡述一下你的column和method, 大家才有辦法幫你找問題 03/16 14:32
: : 推 iosteven:這一台操作 很簡單= ="你的動相 梯度 方法 跟目的等資訊 03/17 13:39
: : → iosteven:要說明白才可以幫你^^，基本上設定好固定時間收吸收峰 03/17 13:40
: : → iosteven:的樣品，是最簡單的目的，是要純化或分Fraction..... 03/17 13:41
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 163.1.130.189
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討論串 (同標題文章)
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完整討論串 (本文為第 3 之 3 篇)：