Re: [求救] FPLC injection 已修改並詳述步驟

看板Biotech作者betouched (上上下下)時間12年前 (2012/03/22 08:29)推噓3(3推 0噓 15→)

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update 資訊與方法,我的FPLC都沒有出現peak 不知道問題在哪裡用打的描述方法有點困難,所以我將照片上傳到dropbox http://0rz.tw/lHY8Y 這是我打出來的圖,UV是那很雜的那條,雜訊很大,沒轍 http://0rz.tw/oCOoA 方法前半段 http://0rz.tw/YoFue 方法後半段 http://0rz.tw/aQpOI Gradient 曲線 http://0rz.tw/hVfWp 前人留下來的圖,打出來應該要長這樣我是在run方法之前.就先inject sample 我手動將 injection valve 轉到 inject 然後打1ml 0.2mg/ml 的sample 再轉到 load 然後按下 run ps.由於實在都沒有peak 所以我連,先 load 在 inject 都玩過了 Setup Lamp Run Time 顯示 Hg 22218h 其實我一直認為是 Lamp 問題,使用說明書上寫的是 run time 我的認知是,燈泡使用時間,所以我認為Lamp已經該換了可是我這邊的博後堅持說他之前才換過,那是倒數時間這個博後,我真的有說不完的想罵他的話覺得還是自救比較快使用的儀器 Pump P-920 UPC-900 ※ 引述《betouched (上上下下)》之銘言： : 之前用FPLC的學長姐不見了之後我才進實驗室 : 現在一個人在努力學習怎麼用這個儀器 : 儀器 AKTA FPLC : 軟體 Unicorn : Column : resource Q 1ml : Method:沿用前人的 method : 1. wash by water : 2. wash by protein solution AB for 20 min : 這期間我用 protein solution A 洗了 sample loop (2ml) : 然後 inject sample into sample loop for 1 ml (0.25mg/ml) : 有確定此時 InjectionValve 是block住的 : 3. injection : 這裡螢幕上顯示不是很明瞭 : 0.02min InjectionValve inject : 0.02min Block Sample_Injection : 0.02min Base Volumn : 2.02min End Block : 2.02min InjectionValve Load : 2.02min End Block : . : . : . : 4. Gradient B from 0-100% for 40 min : 標準品應該在20分鐘左右出來<可是UV還是保持在0上下跳動 : 5. 哭哭 : 一個人看著 FPLC 使用說明書,東弄弄西弄弄得,真是頭大,來個人幫幫我吧哭哭 : ◆ From: 147.126.101.168 : 推 bluep:簡述一下你的column和method, 大家才有辦法幫你找問題 03/16 14:32 : ※ 編輯: betouched 來自: 147.126.101.168 (03/17 02:10) : 推 iosteven:這一台操作很簡單= ="你的動相梯度方法跟目的等資訊 03/17 13:39 : → iosteven:要說明白才可以幫你^^，基本上設定好固定時間收吸收峰 03/17 13:40 : → iosteven:的樣品，是最簡單的目的，是要純化或分Fraction..... 03/17 13:41 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 147.126.101.169

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trumpet

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betouched

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