[求救] Western transfer

看板Biotech作者 (Martyrs)時間12年前 (2011/12/16 00:00), 編輯推噓2(2推 0噓 0→)
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我的Sample是大鼠大腦的total prot. extract 有幾個實驗問題想請教一下大家 1. Transfer時 大家會Try條件到膠上面完全沒有band還是只要抗體抗的到PVDF就好? (聽學長說因為transfer是一致性的 只要PVDF膜上抗體抗的到就好) 目前我試過幾個條件 25, 37.5, 50ug total protein 10% 6% PAGE (8*9 cm^2) Transfer 450mA 2, 2.5 & 3hr (補充:濕式 20% Methanol SDS-free) 用comassie blue和Poncea S染 發現不管任何的Transfer條件 在膠上都有殘留 但是Poncea S染PVDF的結果都可以看到明顯的band 我確定沒有transfer過頭 (我放兩層PVDF) 2. 我做2D的結果 細胞骨架(actin, tubulin family) 和其相關蛋白(CRMP2, Profilin-1)有差異 (無法確認是因為PTM還是expression) 我也用WB確認GAPDH不會受改變 但actin好像沒變化...我懷疑是因為overexpression 所以WB無法看出來 請問一下有做過大鼠實驗 有關於腦部發展或plasticity...的前輩們 要如何驗證我的2D結果 (除了回到cell culture以外) 十分感謝~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.98.129
推
12/16 00:10, , 1F
濕式?半乾式?那種?
12/16 00:10, 1F
※ 編輯: martyrtitan 來自: 114.42.221.26 (12/16 01:31)
推
12/24 01:27, , 2F
那樣看你要的蛋白分子量是多大及特性 vs. % of Methanol
12/24 01:27, 2F
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文章代碼(AID): #1EwXcYkM (Biotech)
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