[求救] cleavaged Caspase3的western

看板Biotech作者 (~^0^~)時間12年前 (2011/12/09 15:57), 編輯推噓4(4推 0噓 11→)
留言15則, 6人參與, 最新討論串1/2 (看更多)
問題:跑western blotting的時候， 以cell signaling的抗體anti caspase 3 (#9662)[1:1000 4度C o/n] 可以看到很明顯的pro-caspase 3 (35 kDa) 以及很微弱的cleavaged caspase 3 (17 kDa) 但是將membrane切開， 單獨壓anti caspase 3(cleavage form)(#9664)[1:500 4度C o/n]， 訊號卻時有時無....= = 後來更改的條件有: protein loading增加為150 ug, 1'Ab 1:250 o/n 但都還是沒有改善 爬文發現好像大家的caspase 3都不太難壓 想請問有人有跟我一樣的狀況嗎?? 或者有其他推薦還不錯的牌子可以試試 謝謝大家抽空看看我冗長的文章~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.125.66
推
12/09 17:37, , 1F
之前我#9662,1抗1:1000,protein<60 ug,還是能壓到
12/09 17:37, 1F
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12/09 17:38, , 2F
不過有些細胞訊號或較弱沒錯 我都用BSA blocking
12/09 17:38, 2F
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12/09 17:39, , 3F
5%牛奶之前試過也OK
12/09 17:39, 3F
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12/09 18:03, , 4F
恩恩 blocking的方式也試過
12/09 18:03, 4F
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12/09 18:05, , 5F
原先是用5%脫脂奶粉也壓不太出來
12/09 18:05, 5F
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12/09 18:06, , 6F
其他的band有比較清楚 不過caspase 3還是老樣子
12/09 18:06, 6F
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12/09 18:08, , 7F
感覺壓caspase3前還要看運氣好才會有一點點訊號...冏rz
12/09 18:08, 7F
推
12/09 18:56, , 8F
Invitrogen的Caspase 3很好壓,40ug 1:1000 o/n ,pro跟cl
12/09 18:56, 8F
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12/09 18:56, , 9F
都很明顯
12/09 18:56, 9F
推
12/09 19:25, , 10F
但是說不定真的沒有刺激apoptosis吧><??
12/09 19:25, 10F
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12/09 19:34, , 11F
要不要先確定apoptosis有無被indeced?
12/09 19:34, 11F
推
12/09 21:12, , 12F
要不要跑個PI/Annexin V flow 確認看看
12/09 21:12, 12F
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12/12 09:03, , 13F
但是PARP有被切割 應該是有活化apoptosis??
12/12 09:03, 13F
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12/12 09:04, , 14F
PARP不是會被caspase 3切割嗎??
12/12 09:04, 14F
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12/13 21:31, , 15F
PARP有被切...就有apoptosis....有些廠牌caspase3很難壓
12/13 21:31, 15F
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