[求救] 細胞一直一直不斷汙染

看板Biotech作者 (瑪果小姐)時間12年前 (2011/11/01 13:34), 編輯推噓10(10推 0噓 12→)
留言22則, 12人參與, 最新討論串1/3 (看更多)
我們lab的lung cancer cell lines一直頻頻有問題 一開始是把所有的lung cancer cell lines抽DNA送STR 結果竟然沒有Human的 這可有問題了~ 不管送幾次都沒有human 可是,我們的lung cancer cell lines是幾年前從別人家來的 偏偏那別人家去送STR每個都正常 冏 (我們家還有好多其他的不同種的cell lines) 在這情況下 只好全丟光lung cancer cell lines 重新要一次 第一次 寄來--> passage --> yeast汙染 (medium用commercial) 第二次 寄來--> passage --> yeast汙染 (這次避免是我個人汙染問題 也換個人接手,由於對方是用flask寄來,medium很滿,接手的人 還把多出很多的medium吸到新的50mltube,然後長滿的細胞 就passage到10cm dish,用對方寄來多的medium,結果有passage 的細胞都汙染,唯一一盤沒passage但是有換medium的cell line沒事) 第三次 寄來--> passage --> yeast汙染 (這次又換回我接手,因為已經要三次了,為了確保,每次處理cell lines之前 我都會讓所有的東西照UV最起碼30min以上,還戴了手套,酒精也狂噴,還換了罐 新的commercial,medium還分裝到 50ml tube,結果還是汙染, 難道是dish比較 容易汙染嗎? incubator我放在最底下那層靠近門會有關西嗎? 同時 我們也都有keep其他不是lung的cell line可是就都沒事) 已經要了三次都汙染~這真的是很大又尷尬的問題,版上有說用抗生素洗 或一直用PBS Wash,有人試過真的能移除嗎? 還有yeast是手上帶進去的嗎? 現在真的一個頭兩個大了~ 希望大家有任何想法都可以討論看看,謝謝了!! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.123.85.163
推
11/01 13:39, , 1F
我想問有直接把對方寄來多的medium取一點放incubator
11/01 13:39, 1F
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11/01 13:40, , 2F
測試,以及取一些放離心管鎖緊室溫測試?
11/01 13:40, 2F
m大,你是說他們寄來的medium分別放在flask和dish各放一盤試試嗎?
推
11/01 13:47, , 3F
incubator? serum?
11/01 13:47, 3F
R大,可是incubator裡還有lab其他人養的也都沒事,不過只有我放最下層,但是我 也還有其他的cell line在養,可是也沒事,serum 我也是拿新的!! 不過我還是會試試 commercial的medium有沒有汙染
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11/01 14:38, , 4F
你們作實驗的早上有洗澡嗎
11/01 14:38, 4F
洗澡? 沒有阿...一早就到LAB了 ,有常常洗手,酒精也用很勤耶!!
推
11/01 14:49, , 5F
樓上機油到底喝了沒？ 每個版都來亂
11/01 14:49, 5F
推
11/01 15:03, , 6F
yeast汙染很嚴重,我都會消毒全設備了說~
11/01 15:03, 6F
我是incubator有換過底下的水盆也換過新的藥劑~但是要是全汙染不應該只有那幾株 lung的,應該其他的也會多少影響! 這就是最不懂的地方了 >"<
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11/01 16:24, , 7F
請板友注意發/推文時不要使用容易使討論失焦的言詞
11/01 16:24, 7F
推
11/01 19:56, , 8F
有人跟你放同一層但是沒事的嗎？
11/01 19:56, 8F
有耶~ 就是我自己養的3T3L1 還有其他有人實驗用的24well plate
推
11/01 20:03, , 9F
yeast汙染非常嚴重 表示你的incubator該清了
11/01 20:03, 9F
推
11/01 21:15, , 10F
雖然不能百分之百準確 但可以只放medium測試看看
11/01 21:15, 10F
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11/01 21:16, , 11F
不過為了其他細胞未來好, incubator還是大清一次吧
11/01 21:16, 11F
大家都怎麼清理incubator呢? 我們上次那次汙染時除了水盆全換,還有噴的清潔劑也用, 酒精也噴過,還有用Formaldehyde薰o/n,還放兩天循環,結果重新放回去養,每個細胞都 長的極差,大概是Formaldehyde效果太強大了
推
11/01 22:30, , 12F
incubator看來不是主因,但是清是一定要的. 有沒有可能是
11/01 22:30, 12F
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11/01 22:31, , 13F
運送過程出了差錯污染了?
11/01 22:31, 13F
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11/01 23:20, , 14F
incubator看有沒有滅菌的功能
11/01 23:20, 14F
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11/02 00:20, , 15F
所以其他使用無菌操作台養出來的都沒汙染?
11/02 00:20, 15F
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11/02 00:20, , 16F
會不會是HEPA filter有問題?
11/02 00:20, 16F
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11/02 04:43, , 17F
裡面的板子什麼的都要拆掉拿去滅菌
11/02 04:43, 17F
推
11/02 15:25, , 18F
內部擦得到的酒精擦 能拆的都拿去滅菌 裝回去後酒精循環
11/02 15:25, 18F
感謝大家這麼熱心的提供想法, 不過Laminar flow有沒有汙染我就不知道了~不過 我們家的laminar flow & incubator都同一台就是!! 我今天有重新擦過incubator,也 有換過水盆還有加上抗菌劑,還把cell 放在比較裡面沒靠近門(不過都還在最下層就是) 也有把原來送來多餘的medium 放在 flask,10cm dish, 3cm dish觀察了,希望有大家 的幫忙,我的細胞可以好好乖乖的不要在跟yeast牽手做好朋友了>< 有好結果再來 告訴大家~謝謝大家~下台一鞠躬!!
推
11/03 00:09, , 19F
妳從頭到尾沒有提到PBS耶，我有一次yeast污染就是因為
11/03 00:09, 19F
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11/03 00:09, , 20F
PBS，建議你觀察一下你的PBS有沒有白色懸浮物
11/03 00:09, 20F
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11/03 00:10, , 21F
有的話就一定是PBS的關係，沒有的話也不一定不是，重配
11/03 00:10, 21F
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11/03 00:10, , 22F
PBS試試看吧
11/03 00:10, 22F
ㄟ~PBS我都沒想到耶@@ 不過大家都用同罐PBS,其他人沒事,應該就不是吧!! ※ 編輯: mango1986 來自: 140.123.85.163 (11/03 11:23)
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