Re: [求救] 凍RAW264.7 MACROPHAGE的方法
Hello,
我也養RAW.. 不過我的凍法跟您有些不同, 但我倒是從來沒有細胞不貼的情況,
1. 我家的RAW是吃RPMI的, 不過medium應該不會差異大太
2. 我的DMSO是配在FCS中, 濃度20% (This is stock)
3. 將細胞收集下來後用純FCS suspend加等量的20% DMSO (Final conc. 10%DMSO),
再丟寶麗龍盒中丟-80 overnight在進LN2.
用這樣的凍法不只是RAW, 我養過的細胞從來沒有任何問題喔^_____^
希望有幫到您的忙, 有疑問的話再互相討論喔^__^
Good luck to your experiments.
※ 引述《shufa (123)》之銘言：
: 發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出
: 以方便板友幫您追蹤問題
: ----請將上列注意事項以 ctrl + k 刪除後開始編輯文章----
: 目前我凍細胞的方式如下：
: 將滿盤的細胞 以PBS WASH後 加入少許的MEDIUM
: 以刮的方式將細胞收集 隨後以離心的方式(1300RPM 30MIN 4度C)
: 收集細胞團並加入含5％DMSO的medium(配完即放入冰桶中)
: 凍細胞時間如下： 4度c 30min
: -20度c 30min
: -80度c overnight（16~18hr）
: 放入液態氮中保存
: 要使用前解凍 就先在37度c下回溫
: 然後seeding於10cm盤培養overnight
: 但隔天要換medium時 發現細胞都沒貼盤～～
: 不知道是出了什麼問題？
: 有去詢問當初給細胞的人 他是說 必須很小心 不能很大力的沖
: 但是此次作出的結果還是不會活
: 因此想請問是否有什麼技巧或步驟仍需要改善的？
: 先謝謝大家的回答！感恩～～
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