Re: [求救] PBMC分離時出現結塊
我也遇到跟原PO一樣的情況耶
況且我的採血量是比較少的 才20CC
FICOLL分離出來還蠻OK的
可是在WASH的時候 PBMC不會離到最底層 會變層條狀或是片狀黏在管壁上
在回溶時常常打不散出現結團的情形 觀察那一團一團的也不像細胞
跟原PO看到的有點像
之前以為是PBS的問題 但改用RPMI仍同樣情況
現在再懷疑是抽血前有進食關係?? 已經不知道哪邊有問題了.....
我簡單附上POTOCOL 請大家幫我找找 謝謝
1.用紫頭管採血
2.全血比Ficoll為 2:1 (8ml:4ml) 緩慢加入
3.2350rpm 30mins 室溫
4.取白色細胞層與上層血漿
5.再離心1000rpm 10mins
6.倒掉 並用10ml RPMI wash
7.再離心1000rpm 10mins後算細胞培養
問題會在第5步驟時跑出來 離心後呈片狀並無法打散會有結團情形
※ 引述《kappaher (惡靈退散)》之銘言：
: 我是用Ficoll-paque分離lymphocyte
: 只是分離的全血量很大(一次分離120ml)
: 取全血時有注意採血管內的血液沒有凝結的血塊
: 全血會先用添加heparin的PBS做稀釋
: 然後進行分層~
: 而後取出霧狀層以3倍體積的PBS/heparin清洗1次
: 離心後去上清液
: 之後用RPMI清洗pellet2次
: 而團塊就在換至RPMI清洗的狀態下產生的
: 團塊的樣子是黃色 有點像是脂肪組織的感覺 大小最大約0.5公分
: 用pipetteman沖散 會變小塊，但沒辦法完全打散
: 在顯微鏡下觀察 結塊的東西並不是細胞
: 樣子有點像沒有菌絲的黴菌
: 而細胞會被它包住 或者細胞會圍在團塊的外面~
: 有點困擾.. 因為數量還滿多 (怕會影響細胞計數、濃度)
: 不曉得有什麼方法可以改善?
: 不知道有做過PBMC分離的各位 是否也有遇到這樣的狀況
: 或是怎麼解決掉團塊出現的問題??
: 或是有可能是什麼問題所產生的?
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◆ From: 203.70.231.32
推
09/18 20:03, , 1F
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