Re: [求救] PBMC分離時出現結塊
提供我們lab的做法
首先我們用紫頭管採血
接著緩和的將全血mix一下後 再用同體積的 RPMI mix
此時 blood:ficoll=2:1
我們先將ficoll分裝至15ml離心管中,每管約4 ml
再用很緩慢的速度將 8 ml mix過的全血滴入含有ficoll的離心管(此離心管呈45度斜置)
之後離心分層的程序跟你的差不多
不過我門一路都是用RPMI來做 wash 及 稀釋
wash時..我們是用10 ml的RPMI來做wash動作
讓你參考看看..
ps.1.我們total約 25cc 的 blood 與 同體積的RPMI mix
2.六管離出的霧狀層集合在同一管在開始做wash的動作
後面就都跟上述說的一樣
希望對妳有所幫助
※ 引述《kappaher (惡靈退散)》之銘言：
: 我是用Ficoll-paque分離lymphocyte
: 只是分離的全血量很大(一次分離120ml)
: 取全血時有注意採血管內的血液沒有凝結的血塊
: 全血會先用添加heparin的PBS做稀釋
: 然後進行分層~
: 而後取出霧狀層以3倍體積的PBS/heparin清洗1次
: 離心後去上清液
: 之後用RPMI清洗pellet2次
: 而團塊就在換至RPMI清洗的狀態下產生的
: 團塊的樣子是黃色 有點像是脂肪組織的感覺 大小最大約0.5公分
: 用pipetteman沖散 會變小塊，但沒辦法完全打散
: 在顯微鏡下觀察 結塊的東西並不是細胞
: 樣子有點像沒有菌絲的黴菌
: 而細胞會被它包住 或者細胞會圍在團塊的外面~
: 有點困擾.. 因為數量還滿多 (怕會影響細胞計數、濃度)
: 不曉得有什麼方法可以改善?
: 不知道有做過PBMC分離的各位 是否也有遇到這樣的狀況
: 或是怎麼解決掉團塊出現的問題??
: 或是有可能是什麼問題所產生的?
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