Re: [求救] 用TRIzol抽RNA時 想要去除DNA
印象中..TRIzol去DNA的能力應該是很好的 :)
不過咧
還是要看你的樣本是什麼，這非常重要
如果是模式物種，我相信應該都超好抽
照你說抽出來的時候質、量都沒有問題
那麼不知道denature gel圖狀況如何？
如果DNA殘留很嚴重，應該是可以看到有一塊在 28s 的上面
不知道你們實驗室是用什麼 Kit 進行 DNase 處理？
有沒有做酒精沉澱？
我之前有用過 Ambion，但可能是操作問題，回收量只有一半左右
一般而言回收量應該要有 80%
這個Kit好處是不用過 chloroform isoamylalcohol
可是因為用了resin，所以聽說是超級貴的 (我不敢看價錢 :)
我們實驗室有用過 Roche、Fermentas 效果都不錯
但都要過chloroform isoamylalcohol，一定會減少回收量
RNAzol要看樣本
我們實驗室的植物樣本，TRIzol不行，RNAzol更慘
建議你想辦法拿到試用品
不要冒然去試
或是找資料看看你的樣本是否合適
希望對你有幫助 / \
※ 引述《chiehdis (chiehhime)》之銘言：
: 爬文已有相同標題 但還是有些不清楚處想麻煩大家m(_ _)m
: 實驗(genomic sequencing)需要大量且較純的RNA.
: 目前我是以TRIzol抽取 質量都還OK~
: 問題出在最後需要用DNase去除DNA的37度30分鐘的incubation.
: 此步驟會讓RNA降解非常嚴重!!濃度直接掉了五.六倍~(nanodrop)
: 膠片也難看到一個極致!!(抱歉手邊無圖~)
: 想請問各位 有無去除DNA而不傷害RNA的方法??
: 爬文發現 似乎用TRIzol抽就可以把大部分DNA去除???
: 跑非變性膠會看到上面有一大坨gDNA嗎??
: (抱歉我沒試過~我接收的prorocol都有DNase的步驟)
: (等材料長好~我會試試看!!)
: 另外 聽說有不需要incubate的去除DNA方法???
: (某種試劑加入幾滴即可??)
: (正等待消息來源寄給我相關資訊)
: 還有一個約是TRIzol價錢兩倍的新產品 RNAzol (第四代??)
: 在實驗中可以不用加chlroform 也可以省掉DNase
: (偷偷說現在有試用品可以拿~不過只有3ml的樣子Q口Q)
: 可是真的爆炸貴的!!!
: 該如何是好??
: 麻煩大家了!!
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◆ From: 140.112.82.238
推
09/28 22:40, , 1F
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