Re: [討論] 關於housekeeping gene

看板Biotech作者pocession (阿宗)時間14年前 (2011/06/14 23:56)推噓5(5推 0噓 9→)

留言14則, 3人參與討論串2/2 (看更多)

※ 引述《DJHINN (dj)》之銘言： : 最近開始著手操作 real-time PCR : 首先就利用 Actin primer pairs 這個 housekeeping gene 練練手 : 順便計算其 amplication efficiency : 但是我發現 : 僅加水的對照組，卻也跑出相同的產物 : 於是第二次我就將所有東西都換新的 : 包括 1. real time PCR Mix solution : 2. 新的稀釋過的 primer : 3. 新分裝過的水 : 結果第二次結果...水仍然跑出產物 : 而且我將結果拿去跑電泳，水的對照組可以看到清楚的條帶 (同產物) : 因為我們實驗室主要的材料對象是昆蟲，也常常會在冰桶上做研磨的動作 : 昆蟲有時也會飛出.... : 這樣有可能會到處汙染嗎? 由其是 housekeeping gene 這種超靈敏的 gene : 不知道是否有前輩有遇過這樣的問題? : 目前: 我重新將血清瓶洗滌過後，滅了新的二次水 : 等一下會用一般PCR測試看看到底問題是不是出現在水上面... 會這會到處污染通常污染源是來自於放大後的產物，檢體中的量少，通常一般清潔方法就可以去除，不太會累積我覺得重點在跑電泳確認這個步驟，跑完後要確實去污基本上電泳的器具和區域要和實驗完全隔離且所有接觸到產物的器具使用完後要以1% 漂白水泡30分鐘再沖洗另外，最好重訂所有藥品然後確認藥品乾淨再做實驗，重訂的藥品送來的時候先借別人的冰箱放確認藥品可用，先找認識的人借個乾淨的區域 (就是沒有操作類似檢體的地方) 在一天的開始 (就是身上還很乾淨沒有沾到產物的時候) 用PCR REAGENT裡面附的水配製，回溶所有藥品，接著空跑幾個反應，確認有無產物，沒有的話這批藥品就可以使用 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 118.231.72.155 ※ 編輯: pocession 來自: 118.231.72.155 (06/14 23:57)

推

DJHINN

06/15 18:08, , 1^F

06/15 18:08, 1^F

推

elderbear

06/16 09:26, , 2^F

06/16 09:26, 2^F

→

elderbear

06/16 09:26, , 3^F

06/16 09:26, 3^F