[討論] 關於housekeeping gene

看板Biotech作者 (dj)時間14年前 (2011/06/14 14:46), 編輯推噓3(305)
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最近開始著手操作 real-time PCR 首先就利用 Actin primer pairs 這個 housekeeping gene 練練手 順便計算其 amplication efficiency 但是我發現 僅加水的對照組,卻也跑出相同的產物 於是第二次我就將所有東西都換新的 包括 1. real time PCR Mix solution 2. 新的稀釋過的 primer 3. 新分裝過的水 結果第二次結果...水仍然跑出產物 而且我將結果拿去跑電泳,水的對照組可以看到清楚的條帶 (同產物) 因為我們實驗室主要的材料對象是昆蟲,也常常會在冰桶上做研磨的動作 昆蟲有時也會飛出.... 這樣有可能會到處汙染嗎? 由其是 housekeeping gene 這種超靈敏的 gene 不知道是否有前輩有遇過這樣的問題? 目前: 我重新將血清瓶洗滌過後,滅了新的 二次水 等一下會用一般PCR測試看看到底問題是不是出現在水上面... -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.80.2

06/14 15:02, , 1F
還有可能是primer dimer 如果是的話請重新設計~
06/14 15:02, 1F

06/14 15:03, , 2F
或是把Primer濃度弄再低一點
06/14 15:03, 2F

06/14 15:13, , 3F
primer dimer 會形成很sharp的條帶嗎 @"@?
06/14 15:13, 3F

06/14 15:13, , 4F
Melting point 都一樣耶 XD
06/14 15:13, 4F

06/14 15:18, , 5F
而且看melting curve 僅有一個peak出現...
06/14 15:18, 5F

06/14 15:18, , 6F
應該不是dimer的問題.....吧 XD
06/14 15:18, 6F

06/14 15:36, , 7F
定序看看... 如果污染的話, 就說服自己primer設計得很靈敏
06/14 15:36, 7F

06/16 07:20, , 8F
很害怕汙染的話,建議改用UDG系統.換dUTP.enzymes
06/16 07:20, 8F
文章代碼(AID): #1DzmFIn2 (Biotech)
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