Re: [求救] 請教關於蠟切與凍切問題~
※ 引述《mzac1b (Goodday)》之銘言：
: 發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出
: 以方便板友幫您追蹤問題
: ----請將上列注意事項以 ctrl + k 刪除後開始編輯文章----
: 想請教高手兩個問題~~
: 1.一般拿來乘載組織的玻片通常有coating東西
: 這樣的玻片可以 reuse 嗎?
: 我是說當你切完片或染完觀察
: 發現不滿意於是
: 把玻璃片上的組織洗掉
: 再重新接組織
: 我個人經驗是處理冰凍切片的組織
: reuse 似乎影響不大
: 不知處理蠟切實玻片 reuse 會不會有影響?
: 2.冰凍切片的脂肪組織可以進行 Oil Red O染色嗎?
: 雖然看到文獻有用 Oil Red O 染組織上的部分脂肪
: 但我剛試染整塊脂肪 (幾乎九成以上是油脂)
: 切片 (切片厚度: 14micro meter)
: 似乎油滴會飄起 (已先福馬林固定過)
: 而且油會混在一起
: 難以得到完整型態的染色結果
: 所以我有點打算放棄這個實驗
: 因為很難染得完整
: 有人有染過或是否知道好染的方法嗎?
: 感謝不吝賜教~
我之前做大鼠脂肪肝model的實驗,
讀了一些paper, 也有請教過病理科醫師,
因為福馬林會溶解tissue內的油滴,
所以會建議用冷凍切片的方式染Oil red觀察.
在我第一批大鼠model,因為餵食飼料太多, 造成Fatty liver太嚴重
肝臟組織放在生理食鹽水裡面都還會飄起來 @@
做冷凍切片的染色結果,有一大片一大片油滴聚集的現象 (跟你說的情形有點像)
在第二批修改過餵食條件後, 油滴產生的量沒有那麼多
就可以看到在組織間的小顆粒油滴分布
然後隨著餵食增加,漸漸的油滴會變大顆, 直至最後又變成大片大片的油滴狀了
所以我認為冷凍切片染Oil red的染色方式是OK的!
只是冷凍切片要先切好,不然容易組織破破的
然後Oil red stain, 我唯一的困擾是在染色後殘留一些大顆黑色雜質..疑似沒洗乾淨 Q_Q
那有些paper你可以看到有人用組織塊蠟切片染 HE stain去觀察油滴分布
有不少是因為使用的臨床組織大多已用蠟塊作保存, 而蠟塊無法做Oil red,
所以才用HE stain去觀察
但在做影像定量組織內油滴的paper, 大多都使用冷凍切片染Oil red的染色方式喔
以上, 是我之前自己看一些paper, 和做實驗的一些小小心得, 與你分享.
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