Re: [求救] IP elution
※ 引述《liquidwater (飛得越高是給越多人看)》之銘言：
: 一般IP都會用2X SDS-Dye elution
: 但是如果heavy chain 或是light chain與所
: 要偵測蛋白的位置相近,就會造成干擾
: 現在是查到可用arginine來elute大部分的蛋白
: 而IGG不會,但是arginine很難借到,不知還有
: 什麼方法可減少IGG的污染呢
: 附帶問一下為什麼用SDS會有light/heavy chain的干擾呢
: 有爬文但看不是很懂
: 謝謝
一般傳統IP是利用Protein A or G bead抓住antibody
再用antibody 去抓supernatant or cell lysate中的antigen
如果你用SDS-PAGE的sample dye去煮,antibody也會和bead分開
和你的東西一起跑進SDS-PAGE裡面造成干擾
如果你的東西位置和heavy or light chain位置相近
你可以試試跑non-reducing的PAGE,這樣antibody的位置會在比較高的位置
(因為heavy and light chain不會分開)
或只是用其他bead (ex. CNBr bead)把antibody conjugate上去
這樣作elute, antibody不至於掉下來,就不會干擾
如果你是用Protein A or G,即使你用arginine作elute, antibody還是會掉下來
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