Re: [求救] 骨頭切片antigen retrivel的方法
※ 引述《alicialai (Fairy Monster)》之銘言：
: ※ 引述《hchung (hiflypig)》之銘言：
: : 骨頭是用石蠟包埋切7 um
: : 再用commercial的玻片貼片
: : 接著用trisodium citrate dihydrate 配antigen retrival solution
: : pH6.0
: : 用 hot plate加熱到95C
: : 不過 我們同時放入骨頭跟大腦的石蠟切片
: : 只有骨頭掉下來...
: : 不知道為什麼
: : try了好幾次都這樣
: : 大概在70度就飄片了
: : 不知道板上的大家有什麼
: 骨頭的切片不是很適合用煮的方式,
: 因為硬度的關係, 即便你脫鈣脫得非常完全,
: 在切片的時候切到wax and bone交界的時候還是會卡卡的,
: 這很容易造成一切看不到的連展片後也看不到的小皺摺~
: 這是造成浮片的主因.. 我那時候已經用到最貴最好的coating玻片,
: 只要一煮照樣浮..
: 後來是改用1mg/ml Pronase在37度處理30min就不會浮了,
: 但是Retrival的方式depends on你的抗體抗原喔,
: 我那時候從trypsin到用煮的用酸的pepsin用commercial的..
: 甚麼方法都試過了, 還有paper寫說要用兩種不同的solution (for cartilage)
: 試試看找一些相關的paper, 應該可以找到作者群是用哪種方式的囉~~
: 加油~
那我可以再問細節一點的問題嗎?
1.你用1mg/ml pronase處理過 還需要用煮的方法做antigne retrieval嗎?
2.我後來其實有用acetone加H2O2去做antigen retrieval (某篇paper寫的)
然而我很懷疑這樣真的能夠retrieval~雖然我染出來感覺有點出來。
但是真的好淡好淡
想問A大用的方法染出來就會很明顯嗎?
3.另外就是我的脫鈣用的是commercial 的脫鈣液，並不是自己泡的EDTA，
不知道這樣會不會影響貼片呢?因為大部分的paper是寫EDTA脫鈣?
最後 很感謝A大~我以為這篇文章應該就會被埋沒起來了~結果又來了一道曙光
希望這次真的能夠克服掉片問題~
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