Re: [求救] 骨頭切片antigen retrivel的方法
之前做SD Rat bone
染IHC脫鈣千萬不能用病理科的那種快速脫鈣液
我是用 20% EDTA 以10N的NaOH滴定至PH 7.0
頭骨大概3週至4週可以脫鈣完成
股骨因為股骨頭較硬 4週至6週可以脫鈣好
如果有實驗失敗的老鼠 多取幾隻股骨頭下來拿一支來當control
在脫鈣後第2週~第3週可更換一次新的20%的EDTA
可以拿細針去刺看看那支當control的股骨頭
刺的下去就是脫鈣完了
記得要沖水至少半天以上
玻片可以先用poly-L-Lysine先泡過再烘乾就能使用
1. 1% HCl Alcohol 1hr
2. 1% HCl Alcohol 1hr
3. 沖水 1hr
4. Distilled water 10 dips(沖10次)
5. Oven 60。C 烤到乾(泡Poly-Lysine之前要等到涼)
6. Poly-lysine solution 10X稀釋 10min
7. Oven 60。C 烤乾即可用
Poly-L-Lysine Solution 廠牌: Sigma 產品編號: P-8920 500ml
後來是懶得泡買現成PolyLysine slide直接用 不過很貴一盒將近NT1000/72片的樣子
老闆有錢我就好辦事
antigen retrivel用電鍋隔水加熱 DAKO有在賣專門煮抗體用的塑膠盒 綠色的
煮完再加3%H2O2 基本上都能切斷formalin的鍵結
所以問題的癥結是在於要用哪一種buffer去煮出來
這就要一樣一樣去試了 我當初也是試很久
Citrate buffer PH6.0 Citrate bufferPH8.0 Trypsin EDTA.......
能試的全試了 這只能一樣樣去try 除非抗體說明書上有 否則就土法練鋼了
Trypsin就不能用煮的 要放37度 oven. 時間長短也要try 我最久try過2小時都有
之後步驟大同小異了 希望能幫到你
當初我也將檢體泡過酒精固定 後來發現泡過10%中性福馬林的效果比泡酒精好
教你幾個切片的小方法 水浴攤開時 水溫最高55度就好了
烘片時 烘箱千萬不要超過60度 超過60度對IHC的抗原是個很大的傷害
從烘箱拿出來要脫蠟時 片子一定要先放冷再過Xylene 比較不會掉片
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