Re: [求救] 骨頭切片antigen retrivel的方法
※ 引述《hchung (hiflypig)》之銘言：
: 骨頭是用石蠟包埋切7 um
: 再用commercial的玻片貼片
: 接著用trisodium citrate dihydrate 配antigen retrival solution
: pH6.0
: 用 hot plate加熱到95C
: 不過 我們同時放入骨頭跟大腦的石蠟切片
: 只有骨頭掉下來...
: 不知道為什麼
: try了好幾次都這樣
: 大概在70度就飄片了
: 不知道板上的大家有什麼
骨頭的切片不是很適合用煮的方式,
因為硬度的關係, 即便你脫鈣脫得非常完全,
在切片的時候切到wax and bone交界的時候還是會卡卡的,
這很容易造成一切看不到的連展片後也看不到的小皺摺~
這是造成浮片的主因.. 我那時候已經用到最貴最好的coating玻片,
只要一煮照樣浮..
後來是改用1mg/ml Pronase在37度處理30min就不會浮了,
但是Retrival的方式depends on你的抗體抗原喔,
我那時候從trypsin到用煮的用酸的pepsin用commercial的..
甚麼方法都試過了, 還有paper寫說要用兩種不同的solution (for cartilage)
試試看找一些相關的paper, 應該可以找到作者群是用哪種方式的囉~~
加油~
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