Re: [求救] 用PCR clone promoter
想請問你有沒有測試過primer可不可用？又是不是一開始就利用Pfu進行PCR？
我之前的經驗是Pfu的PCR效率比較不好，
所以要先確定primer可用與否可以先用Taq或其他效率比較好的enzyme測試
如果確定primer可以用，改回用Pfu時，可能又會發生得不到產物的現象
我之前的經驗是把template DNA (genomic DNA)的濃度降低，
或是在PCR mixture中加入DMSO，就可以得到產物了。
看到產物之後再來調整annealing 溫度等等，
讓所想要的片段可以更容易獲更精準備製造出來
一點點小小的個人經驗
希望能提供幫助^^
※ 引述《roger3112 (我想休息...)》之銘言：
: 小弟我最近要用PCR將一段genomic DNA中一段promoter clone出來
: 但是之前試了很多condition都沒有辦法(溫度，濃度)，
: 想要請教板上有沒有高手做過這種實驗，可以跟我說一下大概要注意什麼嗎?
: 我想要clone出來的長度大概是2Kb左右
: 感謝!!!
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