Re: [求救] buffy coat的分離
※ 引述《Feting ( ><>J <>< し<><)》之銘言：
: 小弟是理工背景實驗室的同學
: 最近需要使用白血球進行實驗
: 加了heparin的血液，用3000rpm、4度c、離心15分鐘(沒有使用ficoll)
: 之後可以看出血液的分層
: 但是卻不知道要如何將buffy coat從血液中抽出來
: 其實我也不是很確定我以為是buffy coat的東西到底是不是buffy coat
: 應該是離心後中間那層很薄的灰白色層吧?
: 想請問各位前輩有甚麼方法可以將buffy coat給分離出來
: 另外，buffy coat分離出來是甚麼樣的狀態?
: 是液體，還是一片膠狀的東西?
: 因為看到某處的操作說明說buffy coat如果夠堅固的話，可以將整片buffy coat挑起
: 由於實驗室的學長姐也沒使用過白血球做實驗，對這些實在不清楚
: 希望各位前輩可以給予指教
: 謝謝
還是回文好了
因為我也只有課程實驗做到，所以就我知道的跟你說
先問一下，3000rpm會不會太多o.o
沒有用ficoll的話..一般來說就是先拿滴管吸掉plasma
然後你再用一個滴管..儘量少吸到下面的紅血球，把整個buffy coat儘量收滿
buffycoat就是血漿下層，紅血球上面很薄的一層白白的
只是因為離心的關係，讓你的不同密度的細胞，分離在小小的地方
因為你沒有ficoll..離心完之後更要小心輕輕操作，太強的晃動你會讓它分離層又亂掉
收滿之後一般來說都會再做處理，或許是用一些lysis buffer(有很多種..但是目的都是
把RBC 溶掉..但是要避免讓你的白血球溶掉)
或許也只是就是多用PBS洗過幾次儘量少一點紅血球在裡面
有錯請更正
我覺得就算是我們本科系的，要麻就是follow以前實驗室的protocol
要不然一開始嘗試，建議..跟著你的reference的protocol先做
以後想改再改..
要不然就是找類似實驗室看看人家的protocol怎麼做
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