[討論] 請問Western Blotting membrane可以剪嗎?

看板Biotech作者 (賭姬)時間13年前 (2010/09/24 13:16), 編輯推噓7(7推 0噓 18→)
留言25則, 12人參與, 最新討論串1/2 (看更多)
想請問各位 作Western Blotting時,transfer完的membrane可以裁剪成條狀 再進行抗體的反應嗎? 也就是說想了解的蛋白質根據其分子量大小裁剪成條狀, 這樣一片membrane可以進行十幾種抗體反應,也一定不會有雜band出現 我家老大禁止這樣做,但實驗室裡有兩派,裁剪的因為速度快就變成紅牌, 沒剪的就像白癡一樣,一種抗體反應完再stripping進行下一種抗體 想請問各位的想法 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 211.76.175.170
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09/24 13:23, , 1F
可以吧 畫完marker後用保鮮膜包起來剪
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09/24 13:23, , 2F
你覺得呢?
09/24 13:23, 2F
推
09/24 13:26, , 3F
剪membrane不是很常用嗎? 沒靠太近的就大致對照marker剪
09/24 13:26, 3F
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09/24 13:27, , 4F
不然如果有很多要看，striping幾次到後來訊號更弱了
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09/24 13:28, , 5F
想請問不支持剪的原因是什麼呢?
09/24 13:28, 5F
推
09/24 13:37, , 6F
之前聽過不支持剪的實驗室，說法是要保持data的完整性，
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09/24 13:37, , 7F
paper上的圖要是一整張membrane不希望剪裁避免造假嫌疑這樣
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09/24 13:42, , 8F
一般western可以剪吧 在我們家若做以前沒做過的蛋白或抗體
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09/24 13:42, , 9F
前幾次會先整張壓確認訊號與抗體品質 確定了以後就可以裁了
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09/24 13:43, , 10F
至於有些情況可能不適合裁 但這都看實驗設計做決定
09/24 13:43, 10F
推
09/24 13:43, , 11F
我覺得如果怕被懷疑造假，也可以先把 membrane scan 起來
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09/24 13:44, , 12F
之後剪完 probe 完後再拼回去，保留起來
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09/24 13:44, , 13F
否則整張壓所耗費的時間 reagent等資源 卻只得到少少的數據
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09/24 13:45, , 14F
實在是太浪費了 樓上說scan也是好方法
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09/24 13:53, , 15F
ECL時把所有membrane都拼好在壓片或照相,看圖或整理都方便
09/24 13:53, 15F
推
09/24 15:42, , 16F
都習慣剪好後拼回來...有誰那麼財財一次染整張8*9cm
09/24 15:42, 16F
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09/24 16:03, , 17F
拼好一起壓片的問題是如果訊號強度差太多 出來的片子會
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09/24 16:03, , 18F
有點醜
09/24 16:03, 18F
推
09/24 16:31, , 19F
如果是IP出來的結果 不建議裁剪 會錯過很多訊息
09/24 16:31, 19F
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09/24 16:32, , 20F
如果是已經確定的結果 裁剪比較適合
09/24 16:32, 20F
推
09/24 18:13, , 21F
建議repeat再一張8*10的頂多剪成2-3張!!
09/24 18:13, 21F
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09/24 19:55, , 22F
是想發 CNS 怕人家要 raw data 嗎? XD
09/24 19:55, 22F
推
09/25 11:49, , 23F
都會剪...
09/25 11:49, 23F
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09/25 14:05, , 24F
repeat時才剪 剛開始試和拼完美data時就整張 有剪會拼回去
09/25 14:05, 24F
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09/25 14:06, , 25F
再照一次 另外IP就不剪了
09/25 14:06, 25F
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文章代碼(AID): #1Cd3G_Mh (Biotech)
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