最近要把insert換到另一個載體(8kbp)
insert的部分用相同的限制酶已經切好了 跑膠check size也是對的
但用同樣的限制酶去切載體(transform到細菌內大量複製,再抽完plasmid)卻一直切不好
兩種限制酶試過作用37度 3h,4h,5h 但要切膠回收時跑出來的band都怪怪的
有位置明顯不對的 有跑出好幾條band的(照理說應該是兩條) 也有band上方有拖拖的痕跡
切完膠用kit回收 再跑膠check 出來的都是兩條band(照理來講回收完應該只有一條)
限制酶各取1ul 也有用指定的buffer plasmid取30ul/100ul和50ul/60ul
可是目前做了6,7次 還是做不出來XD
為了怕有離子干擾 elute都是用滅菌過的二次水
但爬文後 發現很多人有做純化的動作 實驗室是沒有這樣做 不知道純化的必要性大不大
麻煩經驗豐富的版友給個建議 前面做不出來 後面ligation也不用做了XD
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