Re: [求救] western疑問

看板Biotech作者 (民國的福爾摩斯)時間14年前 (2010/06/17 01:14), 編輯推噓6(6推 0噓 9→)
留言15則, 9人參與, 最新討論串3/3 (看更多)
※ 引述《chung1987 (免費聊天 請進...)》之銘言： : ※ 引述《chung1987 (免費聊天 請進...)》之銘言： : 還有一個問題想問問各位 : 既然transfer的時間過久 : 蛋白會跑過頭 : 如果今天我要定量好幾種不同分子量的蛋白 : 在transfer的過程中 : 分子量小的蛋白應該會跑得比大分子量的要快 : 像這樣： : 側面--> : | \ | : | \ | : | \ | : | \ | : | \ | : SDS膠 蛋白 PVDF : 想讓大蛋白都跑到膜上，小蛋白就過頭了 : 反之小蛋白都在膜上時，大蛋白還沒transfer完 : 抓transfer時間也沒用，顧此失彼 : 這樣定量就不準了 : 也不確定蛋白的流失是依量還是依比例 : 有將所有蛋白留在膜上的方法嗎? 在下也有個問題想請教 為什麼跑膠的時候我們固定的是電壓(伏特) 而轉印的時後卻是固定電流(安培) 雖然是目的不同沒錯 但是到底是因為什麼而需要分別固定電流或電壓 可能問的有點模糊 先謝謝板友的解答了 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 58.114.81.132
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06/17 01:29, , 1F
跑電泳也可以固定電流
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transfer我都是固定電壓
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06/17 01:30, , 3F
所以...沒有一定.. 不要把實驗室燒掉就好了。
06/17 01:30, 3F
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06/17 01:48, , 4F
我跑膠是固定電流 轉印固定電壓
06/17 01:48, 4F
推
06/17 01:56, , 5F
同樓上 跑膠上0.03A 下0.06A 轉印電壓15V(2片)
06/17 01:56, 5F
推
06/17 04:52, , 6F
跑膠定電流在跑到最後的時候會因為電阻增加有太熱的可能
06/17 04:52, 6F
推
06/17 09:56, , 7F
跑膠-->固定電壓(80/130/150 V) 轉漬-->固定電流(100mA*N
06/17 09:56, 7F
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06/17 12:07, , 8F
跑膠固定電壓和固定電流差不多一樣 因為電阻不太變動
06/17 12:07, 8F
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06/17 12:07, , 9F
轉漬固定電流則轉漬速率不變 固定電壓則轉漬速率逐漸變慢
06/17 12:07, 9F
推
06/17 12:58, , 10F
電阻跟溫度有關,溫度升高電阻變小,V=IR
06/17 12:58, 10F
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06/17 12:59, , 11F
所以要看系統,有些牌子的機器散熱沒那麼好,或是實驗室沒習慣
06/17 12:59, 11F
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06/17 13:03, , 12F
降溫,此外溫度也會影響pH值
06/17 13:03, 12F
推
06/17 17:10, , 13F
溫度太高膠會有變形的甚至溶掉的可能 然後band就歪七扭八了
06/17 17:10, 13F
推
06/17 22:47, , 14F
這沒有一定,像我就跑膠=定電流,轉印=定電壓(semi-dry)
06/17 22:47, 14F
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06/19 23:32, , 15F
謝謝各位的意見交流 小弟得到很多
06/19 23:32, 15F
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