Re: [求救] 請問有人做過磷酸化的AMPK嗎?
※ 引述《enolam (戀愛的感覺 回來ꐩ》之銘言：
: 我近來嘗試著再做AMP-activated protein kinase (AMPK)
: 他是一個與能量代謝有關的蛋白質，需要被磷酸化後(pAMPK)才會具有活性
: 可是做了一個月pAMPK的band都非常的弱，不知道有沒有哪位版友能提供一
: 下解決的方法，我的一些步驟條件大致如下:
: Transfer: semi-dry, 250 mA, 30 mins
: Blocking: 3% BSA, 2 hrs
: First Ab: 1:800, O/N (cell signalling, diluted in 3% BSA)
: Second Ab: anti-rabbit, 1/30000, 1 hr (cell signalling,
: diluted in 5% skim milk)
: 在搖完一抗和二抗後皆以含0.2% Tween-20的TBST清洗三次
: 結束上述過程後進暗房壓片，無論壓多久band都很弱ˊˋ，感覺band看得出來不細
: 但是就是很淡。
: 再麻煩各位先進給些建議了。
你用的應該是#2531這支吧，我的condtion是：
Transfer: wet, 400mA, 1hr
Blocking: 5% skim milk, 1hr
Primary: 1:1000 in 5% BSA, O/N
Secondary: anti-rabbit,1:10000 in 5% skim milk, 1hr (Jackson Immuno Research)
0.1% Tween-20 TBST wash
通常壓5分鐘訊號就蠻強的
我的sample有mouse brain和human cell line，用上面的做法都沒問題
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.125.206
※ 編輯: Locutus 來自: 140.112.125.206 (05/14 12:59)
※ 編輯: Locutus 來自: 140.112.125.206 (05/14 13:00)
推
05/14 23:04, , 1F
05/14 23:04, 1F
討論串 (同標題文章)
本文引述了以下文章的的內容：
完整討論串 (本文為第 2 之 2 篇)：