[求救] 請問有人做過磷酸化的AMPK嗎?

看板Biotech作者enolam時間15年前 (2010/05/14 11:39)推噓3(3推 0噓 8→)

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我近來嘗試著再做AMP-activated protein kinase (AMPK) 他是一個與能量代謝有關的蛋白質，需要被磷酸化後(pAMPK)才會具有活性可是做了一個月pAMPK的band都非常的弱，不知道有沒有哪位版友能提供一下解決的方法，我的一些步驟條件大致如下: Transfer: semi-dry, 250 mA, 30 mins Blocking: 3% BSA, 2 hrs First Ab: 1:800, O/N (cell signalling, diluted in 3% BSA) Second Ab: anti-rabbit, 1/30000, 1 hr (cell signalling, diluted in 5% skim milk) 在搖完一抗和二抗後皆以含0.2% Tween-20的TBST清洗三次結束上述過程後進暗房壓片，無論壓多久band都很弱ˊˋ，感覺band看得出來不細但是就是很淡。再麻煩各位先進給些建議了。 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 210.60.122.10

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ooooh

05/14 20:59, , 1^F

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jethuang

05/15 09:10, , 2^F

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lusaren

05/18 20:28, , 3^F

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